Экстракт семян гуараны: Гуарана (экстракт) описание и полезные свойства. Применение в кулинарии и медицине.

Гуарана

Состав

Важнейший компонент семян гуараны – гуаранин (кофеин гуараны). Другие активные элементы гуараны – теобромин, теофиллин, сапонины, а также смолы, крахмал, дубильные вещества, пектин.

Свойства

Экстракт гуараны ускоряет метаболические (обменные) процессы в организме, способствуя сжиганию жира. Проблема лишнего веса решается не химически, а биологически, поэтому обеспечивается стабильный вес после похудения. Гуарана полностью усваивается, не раздражает кишечник. Имеет свойство выводить токсины и лишнюю жидкость из организма. Способствует положительному эмоциональному состоянию. Обладает свойством снижать аппетит и уровень холестерина в крови, вычищать жировые бляшки на стенках сосудов, восстанавливать силы после тяжёлой физической работы.

Применение

Когда первооткрыватели высадились на берегах Южной Америки, они были поражены выносливостью и быстротой реакции индейцев. Вскоре они обнаружили, что источник этой энергии кроется в семенах растения гуарана.

В гуаране кофеина содержится больше, чем в каком-либо из известных на сегодняшний день растений. Гуарану применяют для повышения выносливости и работоспособности организма при повышенных физических нагрузках. Гуарана – источник высоко концентрированного гуаранина. Гуарана необходима для борьбы с избыточным весом, так как притупляет чувство голода и улучшает энергетический обмен, обмен веществ, обладает легким мочегонным действием, повышает расщепление жиров, стимулируя их окисление, что в сочетании с ускорением метаболизма способствует разрушению жировых отложений. Экстракт, получаемый из семян растения, применяется для стимуляции сердечно-сосудистой деятельности. Гуарана обладает обезболивающим действием при физических нагрузках на мышцы: она выводит из мышечных тканей молочную кислоту, что находит свое применение в спортивной медицине.

Процесс усвоения организмом содержащихся в гуаране веществ идет постепенно, что дает возможность долго не чувствовать усталость. Экстракт гуараны хорошо всасывается, не раздражая кишечник, стимулирует обмен веществ, а следовательно, и активность мышц. Прием гуараны снижает аппетит, что способствует значительному снижению веса.


Гуарана — описание ингредиента, инструкция по применению, показания и противопоказания

Описание гуараны

Гуарана – вьющаяся лиана семейства Сапиндовые. Растение не сравнимо ни с каким другим по внешнему виду. Похожие на томаты красновато-оранжевые плоды размером с алычу плотно сбиты в длинные кисти. Когда они трескаются, создается впечатление, что открываются сотни глаз – так выглядят распложенные внутри плодов глянцевые темно-коричневые семена в белоснежных «кармашках». После извлечения они больше походят на каштаны, но те, в отличие от них, намного тверже.

Ценная часть растения – семена. Их можно обнаружить в составе чаев, спортивных добавок, комплексов для похудения и даже фармацевтических препаратов, поскольку они эффективны при сердечно-сосудистых и неврологических отклонениях.

Внимание! Семена гуараны пахнут как кофе с шоколадом. Это объясняется тем, что в их составе много кофеина.

Состав экстракта гуараны

В состав гуараны входит огромный ассортимент полезных питательных и лечебных компонентов:

  • дубильные вещества;
  • витамины – PP, A, E, B₁, B₂;
  • гуаранин;
  • кофеин;
  • сапонин;
  • амид;
  • теофиллин;
  • теобромин;
  • цинк;
  • марганец;
  • натрий;
  • магний.
Внимание! Энергетическая ценность 100 г гуараны – 25 ккал. Углеводы – 6,5%.
Белки – 0,1%. Жиры – 0%.

Фармакологические свойства

Самые ценные свойства гуараны – активизирующее и тонизирующее. В составе семян много кофеина. При этом они способны обеспечить более длительный эффект, чем кофе и иные кофеиновые напитки, поскольку содержат огромное количество других компонентов и высвобождают кофеин постепенно.

Гуарана – эффективный природный тоник и энергетик с устойчивым эффектом. Однако кофеином польза семян не ограничивается. Гуарана стимулирует нервную систему, улучшает память и повышает работоспособность мозга. Ее используют как спазмолитик и ингибитор воспаления. Благодаря наличию дубильных веществ растение укрепляет стенки и улучшает работу желудочно-кишечного тракта.

С помощью гуараны можно уменьшить интенсивность и сократить частоту приступов мигрени. Она улучшает метаболизм, очищает организм и выводит из него лишнюю жидкость, что делает ее востребованной среди желающих похудеть. Порошок растения можно найти в составе некоторых препаратов и добавок для похудения.

Противопоказания и побочные эффекты

Гуарана имеет много серьезных противопоказаний. К ним относят:

  • беременность и грудное вскармливание;
  • сердечно-сосудистые нарушения;
  • рефлюкс – выброс пищи обратно из желудка в пищевод;
  • хронические мигрени;
  • язву желудка и 12-перстной кишки;
  • прием лекарственных средств с теофиллином;
  • глаукому и бессонницу;
  • сахарный диабет 1 и 2 типа;
  • гипертензию, тахикардию, аритмию;
  • неврологические заболевания;
  • грыжу пищевода.
Внимание! При злоупотреблении гуараной могут возникнуть побочные эффекты: частое мочеиспускание, звон в ушах, тремор, круги под глазами, нарушения сна, учащенное дыхание, учащенное сердцебиение, тошнота и рвота, диарея.

Применение гуараны

Семена растения можно приобрести в виде порошка, таблеток, капсул, жидкого экстракта, чая, сиропа, ампул. Дозировки индивидуальны для каждого препарата и определяются производителем. Максимальная суточная доза гуараны – 4 г.

Россия напала на Украину!

Россия напала на Украину!

Мы, украинцы, надеемся, что вы уже знаете об этом. Ради ваших детей и какой-либо надежды на свет в конце этого ада –  пожалуйста, дочитайте наше письмо .

Всем нам, украинцам, россиянам и всему миру правительство России врало последние два месяца. Нам говорили, что войска на границе “проходят учения”, что “Россия никого не собирается захватывать”, “их уже отводят”, а мирное население Украины “просто смотрит пропаганду”. Мы очень хотели верить вам.

Но в ночь на 24-ое февраля Россия напала на Украину, и все самые худшие предсказания  стали нашей реальностью .

Киев, ул. Кошица 7а. 25.02.2022

 Это не 1941, это сегодня. Это сейчас. 
Больше 5 000 русских солдат убито в не своей и никому не нужной войне
Более 300 мирных украинских жителей погибли
Более 2 000 мирных людей ранено

Под Киевом горит нефтебаза – утро 27 февраля, 2022.

Нам искренне больно от ваших постов в соцсетях о том, что это “все сняли заранее” и “нарисовали”, но мы, к сожалению, вас понимаем.

Неделю назад никто из нас не поверил бы, что такое может произойти в 2022.

Метро Киева, Украина — с 25 февраля по сей день

Мы вряд ли найдем хоть одного человека на Земле, которому станет от нее лучше. Три тысячи ваших солдат, чьих-то детей, уже погибли за эти три дня. Мы не хотим этих смертей, но не можем не оборонять свою страну.

И мы все еще хотим верить, что вам так же жутко от этого безумия, которое остановило всю нашу жизнь.

Нам очень нужен ваш голос и смелость, потому что сейчас эту войну можете остановить только вы. Это страшно, но единственное, что будет иметь значение после – кто остался человеком.

ул. Лобановского 6а, Киев, Украина. 26.02.2022

Это дом в центре Киева, а не фото 11-го сентября. Еще неделю назад здесь была кофейня, отделение почты и курсы английского, и люди в этом доме жили свою обычную жизнь, как живете ее вы.

P.S. К сожалению, это не “фотошоп от Пентагона”, как вам говорят. И да, в этих квартирах находились люди.

«Это не война, а только спец. операция.»

Это война.

Война – это вооруженный конфликт, цель которого – навязать свою волю: свергнуть правительство, заставить никогда не вступить в НАТО, отобрать часть территории, и другие. Обо всем этом открыто заявляет Владимир Путин в каждом своем обращении.

«Россия хочет только защитить ЛНР и ДНР.»

Это не так.

Все это время идет обстрел городов во всех областях Украины, вторые сутки украинские военные борются за Киев.

На карте Украины вы легко увидите, что Львов, Ивано-Франковск или Луцк – это больше 1,000 км от ЛНР и ДНР. Это другой конец страны. 25 февраля, 2022 – места попадания ракет

25 февраля, 2022 – места попадания ракет «Мирных жителей это не коснется.»

Уже коснулось.

Касается каждого из нас, каждую секунду. С ночи четверга никто из украинцев не может спать, потому что вокруг сирены и взрывы. Тысячи семей должны были бросить свои родные города.
Снаряды попадают в наши жилые дома.

Больше 1,200 мирных людей ранены или погибли. Среди них много детей.
Под обстрелы уже попадали в детские садики и больницы.
Мы вынуждены ночевать на станциях метро, боясь обвалов наших домов.
Наши жены рожают здесь детей. Наши питомцы пугаются взрывов.

«У российских войск нет потерь.»

Ваши соотечественники гибнут тысячами.

Нет более мотивированной армии чем та, что сражается за свою землю.
Мы на своей земле, и мы даем жесткий отпор каждому, кто приходит к нам с оружием.

«В Украине – геноцид русскоязычного народа, а Россия его спасает.»

Большинство из тех, кто сейчас пишет вам это письмо, всю жизнь говорят на русском, живя в Украине.

Говорят в семье, с друзьями и на работе. Нас никогда и никак не притесняли.

Единственное, из-за чего мы хотим перестать говорить на русском сейчас – это то, что на русском лжецы в вашем правительстве приказали разрушить и захватить нашу любимую страну.

«Украина во власти нацистов и их нужно уничтожить.»

Сейчас у власти президент, за которого проголосовало три четверти населения Украины на свободных выборах в 2019 году. Как у любой власти, у нас есть оппозиция. Но мы не избавляемся от неугодных, убивая их или пришивая им уголовные дела.

У нас нет места диктатуре, и мы показали это всему миру в 2013 году. Мы не боимся говорить вслух, и нам точно не нужна ваша помощь в этом вопросе.

Украинские семьи потеряли больше 1,377,000 родных, борясь с нацизмом во время Второй мировой. Мы никогда не выберем нацизм, фашизм или национализм, как наш путь. И нам не верится, что вы сами можете всерьез так думать.

«Украинцы это заслужили.»

Мы у себя дома, на своей земле.

Украина никогда за всю историю не нападала на Россию и не хотела вам зла. Ваши войска напали на наши мирные города. Если вы действительно считаете, что для этого есть оправдание – нам жаль.

Мы не хотим ни минуты этой войны и ни одной бессмысленной смерти. Но мы не отдадим вам наш дом и не простим молчания, с которым вы смотрите на этот ночной кошмар.

Искренне ваш, Народ Украины

Гуарана — полезные свойства и противопоказания

Ботаническая характеристика

Гуарана – это вечнозеленый кустарник, очень живописный. Ветви у него могут вырастать до двенадцати метров, на них размещаются овальная листва с зубчиками. Цветочки кустарника сочные, алого оттенка. Цветочки собраны в метелки. Только спустя пару лет после высадки растения можно будет собрать плоды, не раньше.

У кустарника плоды желтоватого оттенка, а верхушка – алого цвета. В плоде имеются семена овальной формы, напоминающие виноградинки. В Бразилии из семян растения создают вкусный напиток.

Мякоть растения можно убрать, потребуется лишь вымочить плод в жидкости. Спустя время сочная оболочка отделится и можно будет вытащить семена кустарника и промыть. После этого, обычно, семена сушатся и жарятся, а после – измельчаются.

К слову, в гуаране есть кофеин. Благодаря этой добавке и создают ценные энергетические продукты из гуаранового порошка, воды и какао.

Произрастает кустарник на территории Бразилии. Уже продолжительный отрезок времени гуарана выращивается в Паре и Мату-Гросу для фабричных и фармакологических потребностей.

Полезные качества гуараны

В строении растения имеется кофеин, что положительно воздействует на многие процессы в человеческом теле. Обычно, орехи применяются для тонизирования и стимуляции. Особенно полезен продукт при сильных головных болях, мигренях и прочих хворях. В структуре ореха имеется дубильный компонент, что позволяет наладить деятельность ЖКТ. Продукт также нормализирует жировой обмен в теле, увеличивает его работоспособность, стимулирует деятельность нервной системы.

Кустарник позволяет понизить аппетит, также продукт активно эксплуатируют в борьбе с излишними килограммами. Кустарник прекрасно воздействует на тело человека при хронической усталости, помогает побороть этот неприятный недуг.

Плоды растения активно применяются в спортивных целях. Правильно подобранное энергетическое питание поможет спортсменам стать лучше, сильнее и выносливее. Гуарана – это замечательный продукт, что позволяет восстановить силы после продолжительных тренировок, физических нагрузок. Продукт дополнительно увеличивает физическую активность, сжигает больше калорий при нагрузках. В строении плодов присутствует кофеин, теобромин. Эти компоненты повышают внимание, не позволяют усталости проявить себя раньше, чем это необходимо. Продукт еще и стимулирует сердечную деятельность, положительно влияет на весь организм. Из растения производят ценные экстракты, что позволяют эффективнее избавляться от липидов, продукт еще и усиливает вещественный обмен. Растение также позволяет вывести из тела токсины, излишки жидкости.

Гуарана активно эксплуатируется для похудения. Так орех начали применять еще с древних времен. Некоторые народы добавляли в кофе зернышки растения, чтобы улучшить память, худеть и не вредить организму. Особенно полезно растение в летний зной, когда желание освежиться стоит превыше всего! Сок кустарника отлично тонизирует, охлаждает и избавляет от жажды, даже лучше, нежели обычная вода или специальный тоник.

Растение содержит в своем строении добавки, что способствуют понижению аппетита, а это полезно при занятиях спортом. Часто растение добавляют в пищу для похудения.

От диет каждый человек становится усталым, раздражительным, но гуарана помогает это быстро побороть. Она укрепляет и успокаивает тело, насыщает его полезными компонентами, улучшает сердечную деятельность.

При попадании в организм растение начинает активно стимулировать обменные механизмы, ускоряет расщепление липидов и предоставляет телу дополнительные калории в виде энергетического подъема. Так можно повысить собственную выносливость во время тренировок. При похудении трава дает человеку полезные компоненты, поэтому он не ощущает признаки усталости на интенсивных тренировках. Более того, на время человек становится существенно сильнее, можно худеть быстрее, но не в ущерб собственному здоровью! Гуарана, к слову, еще и восстанавливает тело после нагрузок.

Плоды кустарника помогают активно бороться с ожирением и целлюлитом. Эти проблемы сложно преодолеть, но с помощью этого растения все возможно. Еще орех помогает улучшить кровоток, увеличивает потенцию и стимулирует память, а также нормализует деятельность кишечника, понижает показатели холестерина.

Если вы активно худеете, то гуарану требуется принимать шесть недель, не более. А после лучше сделать месячный перерыв. Во время паузы потребуется придерживаться сбалансированной диеты, чтобы эффект не был утрачен.

Растение помогает излечить диарею, ожирение, артрит, депрессивные состояния, усталость. Растение вызывает сексуальную тягу, лечит атеросклероз, оберегает сосуды от бляшек из холестерина. На клеточном уровне растение усиливает метаболизм, положительно воздействует на кровоток.

Растение благотворно воздействует на печень, чистит ее от токсинов, стимулирует лучшее желчеотделение. Гуарановые напитки подавляют болезненные ощущения, избавляют от запоров, излечивают кожные недуги.

Полезные качества ореха

Плоды растения активно применяются в спортивных целях. Правильно подобранное энергетическое питание поможет спортсменам стать лучше, сильнее и выносливее. Гуарана – это замечательный продукт, что позволяет восстановить силы после продолжительных тренировок, физических нагрузок. Продукт дополнительно увеличивает физическую активность, сжигает больше калорий при нагрузках. В строении плодов присутствует кофеин, теобромин. Эти компоненты повышают внимание, не позволяют усталости проявить себя раньше, чем это необходимо. Продукт еще и стимулирует сердечную деятельность, положительно влияет на весь организм. Из растения производят ценные экстракты, что позволяют эффективнее избавляться от липидов, продукт еще и усиливает вещественный обмен. Растение также позволяет вывести из тела токсины, излишки жидкости.

Гуарана активно эксплуатируется для похудения. Так орех начали применять еще с древних времен. Некоторые народы добавляли в кофе зернышки растения, чтобы улучшить память, худеть и не вредить организму. Особенно полезно растение в летний зной, когда желание освежиться стоит превыше всего! Сок кустарника отлично тонизирует, охлаждает и избавляет от жажды, даже лучше, нежели обычная вода или специальный тоник.

Растение содержит в своем строении добавки, что способствуют понижению аппетита, а это полезно при занятиях спортом. Часто растение добавляют в пищу для похудения.

От диет каждый человек становится усталым, раздражительным, но гуарана помогает это быстро побороть. Она укрепляет и успокаивает тело, насыщает его полезными компонентами, улучшает сердечную деятельность.

При попадании в организм растение начинает активно стимулировать обменные механизмы, ускоряет расщепление липидов и предоставляет телу дополнительные калории в виде энергетического подъема. Так можно повысить собственную выносливость во время тренировок. При похудении трава дает человеку полезные компоненты, поэтому он не ощущает признаки усталости на интенсивных тренировках. Более того, на время человек становится существенно сильнее, можно худеть быстрее, но не в ущерб собственному здоровью! Гуарана, к слову, еще и восстанавливает тело после нагрузок.

Плоды кустарника помогают активно бороться с ожирением и целлюлитом. Эти проблемы сложно преодолеть, но с помощью этого растения все возможно. Еще орех помогает улучшить кровоток, увеличивает потенцию и стимулирует память, а также нормализует деятельность кишечника, понижает показатели холестерина.

Если вы активно худеете, то гуарану требуется принимать шесть недель, не более. А после лучше сделать месячный перерыв. Во время паузы потребуется придерживаться сбалансированной диеты, чтобы эффект не был утрачен.

Растение помогает излечить диарею, ожирение, артрит, депрессивные состояния, усталость. Растение вызывает сексуальную тягу, лечит атеросклероз, оберегает сосуды от бляшек из холестерина. На клеточном уровне растение усиливает метаболизм, положительно воздействует на кровоток.

Растение благотворно воздействует на печень, чистит ее от токсинов, стимулирует лучшее желчеотделение. Гуарановые напитки подавляют болезненные ощущения, избавляют от запоров, излечивают кожные недуги.

Показания и запреты

Какие недуги излечивает трава? Продукт стимулирует обменные механизмы, удаляет токсины, корректирует показатели холестерина, излечивает артрит, лихорадку, дизентерию, головные боли. Растение является натуральным афродизиаком.

В каких ситуациях запрещено потреблять растение? При передозировке гуараной могут наблюдаться представленные симптомы: бессонница, раздражительность, высокое мочеобразование, тошнота, тремор, рвота, головокружение, аритмия, частое сердцебиение, судороги. Заметили у себя что-то? Тогда обратитесь за консультацией к доктору. Употреблять продукт запрещается особам, которым еще не исполнилось восемнадцать лет, беременным девушкам и кормящим мамочкам. Запрещается потреблять продукт людям, что страдают от сердечных недугов, язв, сахарного диабета, грыж пищевода.

Лекарственные рецепты

  • Излечиваемся от ожирения. Необходимо внутрь потреблять примерно двести миллиграмм гуаранового экстракта в сутки. Просто запивайте порошок водой или принимайте продукт в специальных капсулах.
  • Избавляемся от астении. При потреблении пищи потребуется принимать примерно четыреста миллиграмм гуаранового экстракта. Схема лечения – пара недель. Сухой экстракт можно отыскать в виде капсул.
  • Готовим исцеляющий напиток для кишечных расстройств. Просто возьмите пару чайных ложечек сухого гуаранового порошка, залейте продукт стаканом кипятка и пусть напиток настаивается на протяжении пятнадцати минут. При легкой диарее выпивайте каждый день пару стаканов подобного напитка.
  • Готовим тонизирующий чай, что поможет излечиться от депрессивных состояний, усталости и бессонницы. Вначале просто доведите воду до кипения, а после остудите ее до восьмидесяти пяти градусов. Засыпьте в жидкость пару столовых ложечек гуараны и настаивайте средство на протяжении пары минут.

Интересные сведения

  1. Гуарану открыли индейцы, по крайне мере так принято считать. Они готовили из плодов растения тонизирующие и успокаивающие напитки, которые придавали больше сил и энергии. Когда-то давно, на побережье Латинской Америки приплыли путешественники, которые сильно удивились выносливости и быстроте индейцев. Они узнали, что причина этого феномена простая – гуарана.
  2. В мире орехом начали интересоваться только в девятнадцатом столетии.
  3. Из орехов производят огромное количество энергетических напитков, что эффективно утоляют жажду и служат профилактикой серьезных недугов.
  4. Особенно интересны плоды кустарника. Из красных плодов проступают черные семена, и со стороны все это напоминает человеческие глаза. Благодаря такой особенности был создан миф, где говорится о ребенке, которого обожала вся деревня, но его убил злое черное божество. По ребенку все тосковали, и доброе божество решило смилостивиться над деревенскими жителями, и он подарил им глаза ребенка. Один глаз был высажен в лесу, и выросло дерево гуараны, а второй глаз культивировали деревенские жители.

экстракт гуараны

Гиалуроновая кислота (3)

коллаген (250)

витамин С (195)

цинк (173)

Алое-вера (1)

масло ши (102)

L-карнитин (100)

кокосовое масло (100)

омега-3 (99)

витамин D3 (93)

витамин Е (50)

пантенол (92)

Пептиды (1)

рыбий жир (87)

Протеины (1)

муцин улитки (70)

экстракт ромашки (1)

витамины (58)

витамин B12 (57)

витамин B6 (57)

масло какао (57)

магний (53)

кальций (49)

Кератин (1)

масло миндальное (49)

пищевые волокна (49)

таурин (49)

имбирь (48)

масло льняное (47)

полба (44)

глюкозамин (43)

календула (43)

масло оливы (42)

пчелиный воск (42)

спирулина (41)

хондроитин (41)

масло жожоба (40)

масло арганы (39)

облепиха (37)

витамины группы В (36)

коэнзим Q10 (35)

мука льняная (35)

розовая вода (35)

ромашка (35)

экстракт зеленого чая (35)

семена льна (34)

биотин (33)

мята (33)

L-аргинин (1)

ланолин (32)

семена чиа (32)

фруктовые кислоты (32)

центелла (32)

D-пантенол (2)

концентрат сывороточного белка (31)

соль морская (31)

экстракт гуараны (1)

L-лейцин (30)

масло кедра (30)

L-валин (29)

крапива (29)

мочевина (29)

пиколинат хрома (29)

селен (29)

L-изолейцин (28)

кэроб (28)

масло виноградной косточки (28)

хлорелла (28)

квасцы (27)

медь (21)

экстракт угля (27)

куркума (26)

лимонник (26)

масло авокадо (26)

масло лаванды (26)

рутин (26)

женшень (1)

витамин A (22)

иван-чай (24)

кислоты (24)

кофеин (24)

Черный чай (1)

шиповник (24)

глицин (23)

лаванда (23)

масло облепиховое (23)

шалфей (23)

аминокислоты (22)

мука рисовая (22)

золото (21)

мака перуанская (21)

ретинол (21)

MSM (20)

бузина (20)

железо (20)

киноа (20)

масло макадамии (20)

фитоэстрогены (20)

фолиевая кислота (20)

экстракт имбиря (20)

гранат (19)

инулин (19)

какао (19)

масло иланг-иланг (19)

масло чайного дерева (19)

омега-6 (19)

экстракт гарцинии (19)

эритрит (19)

масло апельсина (18)

масло мяты (18)

мука из коньяку (18)

ниацинамид (18)

череда (18)

экстракт лопуха (18)

экстракт расторопши (18)

эхинацея (18)

5-HTP (17)

кокосовая стружка (17)

кокосовое молоко (17)

омега-9 (17)

репейное масло (17)

семена конопли (17)

сенна (17)

амарант (16)

витамин B1 (16)

масло лимона (16)

масло эвкалипта (16)

экстракт алоэ вера (16)

экстракт гинкго билоба (16)

гидроксиапатит (15)

калий (15)

касторовое масло (15)

креатин (15)

лютеин (15)

мумие (15)

перец (15)

абрикосовое масло (14)

дигидрокверцетин (14)

корица (14)

ламинария (14)

лецитин (14)

масло подсолнечника (14)

плацента (14)

стволовые клетки (14)

тысячелистник (14)

L-метионин (13)

L-орнитин (13)

зеленый чай (13)

изолят соевого белка (13)

куркумин (13)

масло зародышей пшеницы (13)

масло конопляное (13)

салициловая кислота (13)

травы (13)

экстракт мелиссы (13)

DHA (12)

бромелайн (12)

зеаксантин (12)

зеленая гречка (12)

крупа гречневая (12)

листья смородины (12)

масло лемонграсса (12)

мелисса (12)

нут (12)

розмарин (12)

холин (12)

черный кунжут (12)

ягоды годжи (12)

альфа-липоевая кислота (11)

витамин К (3)

душица (11)

Керамиды (1)

миндаль (11)

сабельник (11)

чечевица (11)

экстракт артишока (11)

баобаб (10)

витамин B2 (10)

гидролизованный коллаген (10)

глицерин (10)

лактобактерии (10)

масло кунжутное (10)

масло розы (10)

масло шалфея (10)

минерал (10)

овес (10)

псиллиум (10)

рис (10)

стевия (10)

чага (10)

черника (10)

экстракт донника (10)

экстракт мяты (10)

экстракт окопника (10)

АПАВ не более 5% (9)

гамамелис (9)

коэнзим (9)

лемонграсс (9)

масло грецкого ореха (9)

масло розмарина (9)

серебро (9)

сквалан (9)

спирт (9)

церамиды (9)

экстракт пустырника (9)

эссенциальные фосфолипиды (9)

глютамин (1)

деготь (8)

изофлавоны сои (8)

индол-3-карбинол (8)

кокосовая вода (8)

кокосовая мука (8)

лимонная кислота (8)

люцерна (8)

ментол (8)

мёд (8)

пшеница (8)

семена тыквы (8)

сукралоза (8)

цветки липы (8)

экстракт граната (8)

экстракт солодки (8)

экстракт шалфея (8)

ягоды асаи (8)

L-триптофан (7)

авокадо (7)

гималайская соль (7)

горох (7)

капуста брокколи (7)

клевер (7)

кокос (1)

колострум (7)

линолевая кислота (7)

масло черного тмина (7)

можжевельник (7)

моринги (7)

мякоть кокоса (7)

пантотеновая кислота (7)

плодоножки вишни (7)

прополис (7)

ростки пшеницы (7)

топинамбур (7)

хром (7)

чабрец (7)

экстракт гриффонии (7)

экстракт зеленого кофе (7)

экстракт кошачий коготь (7)

экстракт пассифлоры (7)

экстракт чаги (7)

бифидобактерии (6)

боярышник (6)

водоросли (6)

гречиха (6)

кверцетин (6)

кора африканской березы (6)

крупа манная (6)

кукуруза фиолетовая (6)

листья березы (6)

малина (6)

масло корицы (6)

экстракт боярышника (6)

экстракт снежных водорослей (6)

экстракт хмеля (6)

экстракт черники (6)

L-карнозин (5)

L-лизин (5)

L-теанин (1)

антоцианы черники (5)

боровая матка (5)

зверобой (5)

кедровый орех (5)

кукурузные рыльца (5)

лопух (5)

масло арахиса (5)

масло баобаба (5)

масло бергамота (5)

масло герани (5)

масло жасмина (5)

масло можжевельника (5)

масло персиковое (5)

масло пихтовое (5)

масло тыквенное (5)

масло хлопка (5)

масло ши (карите) (5)

мескит (5)

мука гречневая (5)

мука миндальная (5)

наттокиназа (5)

ним (5)

овсяная мука (5)

ростки ячменя (5)

сок лимона (5)

солодка (5)

хвощ (5)

хитозан (5)

шелковица (5)

экстракт виноградных косточек (5)

экстракт конского каштана (5)

экстракт левзеи (5)

экстракт подорожника (5)

экстракт хлопка (5)

экстракт центеллы азиатской (1)

L-цитруллин (4)

аллантоин (4)

белый кунжут (4)

бета-каротин (4)

брусника (4)

гриб рейши (4)

девясил (4)

дистиллят шалфея (4)

инозитол (4)

ирис (4)

клюква (4)

кора дуба (4)

лапчатка белая (4)

листья земляники (4)

лукума (4)

манго (4)

масло гвоздики (4)

масло горчичное (4)

масло грейпфрута (4)

масло камелии (4)

масло маковое (4)

масло рыжиковое (4)

маточное молочко (4)

морские водоросли (4)

оксид цинка (4)

пижма (4)

подорожник (4)

растительный белок (4)

рис бурый (4)

сквален (4)

тинозан (4)

томат (4)

тростниковый сахар (4)

укроп (4)

фенхель (4)

хуанарпо мачо (4)

чесночное масло (4)

экстракт виноградных листьев (4)

экстракт горянки (4)

экстракт диоскореи (4)

экстракт ласточкиного гнезда (4)

экстракт мыльного корня (4)

экстракт прополиса (4)

экстракт розы (4)

экстракт укропа (4)

экстракт фенхеля (4)

экстракт шиитаке (4)

экстракт эшшольции (4)

эластин (4)

элеутерококк (4)

янтарная кислота (4)

агар-агар (3)

базилик (3)

булгур (3)

водоросли вакаме (3)

воск дерева ним (3)

горчица (3)

готу кола (3)

грейпфрут (3)

дистиллят василька (3)

дрожжи (3)

ива (3)

изолят горохового белка (3)

изомальтулоза (3)

капуста (3)

келп (3)

клетчатка (3)

клубника (3)

кора осины (3)

кофейные зерна (3)

кукурузная мука (3)

кунжут (3)

лабазник (3)

листья брусники (3)

листья облепихи (3)

масло бэй (2)

масло бурачника (3)

масло лавровое (3)

масло пачули (3)

масло рисовых отрубей (3)

масло ромашки (3)

мицеллы (3)

молочная кислота (3)

Морковь (1)

морошка (3)

мускатный орех (3)

ниацин (3)

овсяные хлопья (3)

одуванчик (3)

пажитник (3)

пшено (3)

рисовые хлопья (3)

рожь (3)

семена горчицы (3)

семена расторопши (3)

трутовик (3)

фукус (3)

хлорид цетилпиридиния (3)

хлорофилл (3)

чеснок (3)

шишки (3)

экстракт бессмертника (3)

экстракт босвелии (3)

экстракт валерианы (3)

экстракт йохимбе (3)

экстракт камелии (3)

экстракт красного клевера (3)

экстракт куркумы (3)

экстракт пажитника (3)

экстракт хурмы (3)

экстракт цимицифуги (3)

эшшольция (3)

ягоды со-пальметто (3)

ядра абрикосовых косточек (3)

L-глутамин (2)

L-тирозин (2)

агуахе (2)

азелаиновая кислота (2)

ананас (2)

апельсин (2)

бамбуковая соль (2)

бобы маш (2)

василек (2)

витамин C (2)

витамин В6 (2)

витамины группы B (2)

витекс (2)

володушка (2)

гвоздика (2)

гибискус (2)

жир из печени трески (2)

зеленый овес (2)

изюм (2)

йод (2)

камелия (2)

картофельные хлопья (2)

кора ивы (2)

кора ивы белой (2)

кордицепс (2)

красная щетка (2)

лизат бактерий (1)

лизоцим (2)

ликопин (2)

липа (2)

лошадиный жир (2)

масла (2)

масло арбузное (2)

масло базилика (2)

масло бразильского ореха (2)

масло вербены (2)

масло виноградное (2)

масло дерева ши (2)

масло ели (2)

масло кукурузное (2)

масло расторопши (2)

масло розового дерева (2)

масло сливовой косточки (2)

масло сосны (2)

масло фундука (2)

морской коллаген (2)

натуральные масла (2)

очанка лекарственная (2)

пальма сереноа (2)

пион (2)

плоды рябины (2)

порошок абрикоса (2)

протеины шёлка (2)

птичий горец (2)

ресвератрол (2)

рибофлавин (2)

руккола (2)

сача инчи (2)

симетикон (2)

смородина (2)

соя (2)

сульсен (2)

тирозин (2)

трава галеги (2)

тыква (2)

фисташки (2)

фосфатидилсерин (2)

фосфор (2)

цикламат (2)

цинк (2)

чай анчан (2)

черемуха (2)

черный жемчуг (2)

черный тмин (2)

экстракт витекса священного (2)

экстракт джимнемы (2)

экстракт дикого ямса (2)

экстракт икры (2)

экстракт инжира (2)

экстракт календулы (2)

экстракт мартинии (2)

экстракт мать-и-мачехи (2)

экстракт пантов марала (2)

экстракт пиона (2)

экстракт плюща (2)

экстракт хряща акулы (2)

якон (2)

аланин (1)

L-валин (1)

L-глутатион (1)

L-треонин (1)

S-ацетил (1)

UVA-фильтр (1)

абрикос (1)

абсолют почек черной смородины (1)

автолизат пивных дрожжей (1)

алмазная пудра (1)

альгинат из бурых водорослей (1)

арабиногалактан (1)

арахис (1)

арония (1)

астаксантин (1)

ацетилцистеин (1)

ацикловир (1)

березовое масло (1)

бор (1)

бульон на травах 67,5% (1)

вазелин (1)

витамин B (1)

витамин B3 (1)

витамин B7 (1)

витамин В (1)

витамин В1 (1)

витамин В12 (1)

витамин В2 (1)

витамин В3 (1)

витамин В5 (1)

витамин В7 (1)

вишня (1)

вода родниковая (1)

водоросли экстракт (1)

галангал (1)

гвоздика душистая (1)

гидролизованный кератин (1)

гидролизованный шелк (1)

гипоаллергенный нетканный материал (1)

глутатион (1)

горечь (экстракт куваши) (1)

гравиола (1)

грецкий орех (1)

декспантенол (1)

джимева (1)

дистиллят крапивы (1)

дистиллят липы (1)

дистиллят лопуха (1)

дсРНК (1)

ежевика (1)

жожоба (1)

загуститель альгинат из бурых морских водорослей (1)

йодказеин (1)

кампотский перец (1)

камю камю (1)

канихуа (1)

каолин (1)

капуста броколли (1)

каштан (1)

кедровая живица (1)

кертин (1)

кетон малины (1)

коллагеновые пептиды (1)

комплекс липосентол-Н (1)

конжаковая камедь (1)

косточка клубники (1)

кофейные зерна робуста (1)

красный корень (1)

крем (1)

кукурузные отруби (1)

кукурузный сироп (1)

курага (1)

ламеллярная эмульсия (1)

лейцин (1)

лимон (1)

лиственничный бальзам (1)

листья бадана (1)

листья кипрея (1)

листья ортосифона (1)

листья толокнянки (1)

литий (1)

люцерна (1)

магний (1)

мандарин (1)

масло аниса (1)

масло виноградной косточки (1)

масло гвоздики (1)

масло ладана (1)

масло лесного ореха (1)

масло литсея кубеба (1)

масло миндальное (1)

масло миндаля (1)

масло мускатного ореха (1)

масло органа (1)

масло плюмерии (1)

масло померанца (1)

масло примулы вечерней (1)

масло рисовое (1)

масло тыквы (1)

масло цитронеллы (1)

масло цитрусовых (1)

масло ши (1)

матэ (1)

матча (1)

мелатонин (1)

микроэлементы (1)

минералы (1)

натриевые соли (1)

натрий (1)

натуральные ПАВ (1)

оливковое масло (1)

панкреатин (1)

пантенол (1)

папаин (1)

паприка (1)

пиперин (1)

пихтовое масло (1)

пищевая сода (1)

порошок корня ревеня пальчатого (реин) (1)

порошок свеклы (1)

порошок чая ку цяо (1)

пробиотики (1)

рапсовое масло (1)

распущенная целлюлоза (1)

репешок (1)

рисовый крахмал (1)

ройбуш (1)

свекла (1)

семена подсолнечника (1)

серин (1)

смола акации (1)

соевый жмых (1)

тизоль (1)

трава тимьяна обыкновенного (1)

убихинол (1)

фарнезол (1)

ферменты ржи (1)

фито-мелатонин (1)

флавоноиды цитрусовых (1)

фундук (1)

хлопья из зеленого гороха (1)

хромабрайт (1)

цистин (1)

чернослив (1)

шафран (1)

шунгит (1)

э (1)

экстракт базилика (1)

экстракт белой ивы (1)

экстракт босвеллии (1)

экстракт василька (1)

экстракт грецкого ореха (1)

экстракт жемчуга (1)

экстракт жимолости (1)

экстракт звездчатки (1)

экстракт иглицы (1)

экстракт клюквы (1)

экстракт корня ревеня сибирского (1)

экстракт крушины (1)

экстракт листьев грецкого ореха (1)

экстракт льнянки (1)

экстракт маклейи (1)

экстракт мимозы (1)

экстракт пальмы сабаль (1)

экстракт пуэрарии (1)

экстракт семян грейпфрута (1)

экстракт сушеницы (1)

экстракт тмина (1)

экстракт тыквы (1)

экстракт фасоли (1)

экстракт хлопока (1)

экстракт худии (1)

экстракт чистотела (1)

экстракт эдельвейса (1)

экстракт эурикомы (1)

яблоко (1)

японский коллаген (1)

Ничего не найдено

Комплекс экстрактов Зеленого чая Кофе и Гуараны капс 30 шт с бесплатной доставкой на дом из «ВкусВилл»

При необходимости корректировать вес часто помимо диеты советуют увеличить двигательную активность, причем не обязательно это должны быть занятия спортом. Подойдут пешие прогулки, плавание в бассейне или йога. Однако при соблюдении диет человек, как правило, испытывает нехватку энергии, ощущает упадок сил и настроения. Поэтому уже через несколько дней многие отказываются от дополнительной физической нагрузки и, наоборот, двигаются меньше обычного, что снижает эффективность мер по коррекции веса. Компоненты комплекса улучшают настроение, повышают эмоциональный фон, увеличивают работоспособность и придают бодрости. Экстракт зеленого чая (галлат эпигаллокатехина) снижает индекс массы тела, массу тела, уменьшает окружность талии, способствует уменьшению уровня холестерина, глюкозы и липидов в крови; придает чувство бодрости и улучшает настроение; усиливает утилизацию жиров благодаря антиоксидантным свойствам. Экстракт зеленого кофе снижает массу тела; уменьшает количество жировой ткани; снижает уровень глюкозы и липидов в крови; улучшает обмен жиров за счет антиоксидантных свойств. Экстракт гуараны тонизирует, улучшает эмоциональный фон, повышает работоспособность; уменьшает чувство голода. Хром входит в состав инсулина, за счет чего влияет на уровень сахара в крови. По данным клинических исследований прием солей хрома может способствовать снижению массы тела.

178 руб / шт 178 178

от партнера «Планета здоровья»

Выбрать
любимым Выбран
любимым

Описание

При необходимости корректировать вес часто помимо диеты советуют увеличить двигательную активность, причем не обязательно это должны быть занятия спортом. Подойдут пешие прогулки, плавание в бассейне или йога. Однако при соблюдении диет человек, как правило, испытывает нехватку энергии, ощущает упадок сил и настроения. Поэтому уже через несколько дней многие отказываются от дополнительной физической нагрузки и, наоборот, двигаются меньше обычного, что снижает эффективность мер по коррекции веса.
Компоненты комплекса улучшают настроение, повышают эмоциональный фон, увеличивают работоспособность и придают бодрости.
Экстракт зеленого чая (галлат эпигаллокатехина) снижает индекс массы тела, массу тела, уменьшает окружность талии, способствует уменьшению уровня холестерина, глюкозы и липидов в крови; придает чувство бодрости и улучшает настроение; усиливает утилизацию жиров благодаря антиоксидантным свойствам.
Экстракт зеленого кофе снижает массу тела; уменьшает количество жировой ткани; снижает уровень глюкозы и липидов в крови; улучшает обмен жиров за счет антиоксидантных свойств.
Экстракт гуараны тонизирует, улучшает эмоциональный фон, повышает работоспособность; уменьшает чувство голода.
Хром входит в состав инсулина, за счет чего влияет на уровень сахара в крови. По данным клинических исследований прием солей хрома может способствовать снижению массы тела.

Показания к применению

Рекомендуется в качестве биологически активной добавки к пище — дополнительного источника хрома, а также источника катехинов (эпигаллокатехина галлата) и кофеина, содержащей гидроксикоричные кислоты, в частности, хлорогеновую кислоту. Компоненты комплекса улучшают настроение, повышают эмоциональный фон, увеличивают работоспособность и придают бодрости; оказывают разностороннее действие на обмен веществ, способствуя коррекции массы тела.

Бренд

Нет бренда

Производитель

ВТФ

МНН/Действующее вещество

экстракт зеленого гуараны+экстракт зеленого кофе+экстракт зеленого чая

Количество в упаковке, шт

30

Состав

Активные вещества:Экстракт семян гуараны (экстракт семян гуараны, мальтодекстрин), экстракт зеленого кофе, экстракт зеленого чая. Содержание активных веществ в 1 капсуле : Хром-25 мкг; Катехины (эпигаллокатехин галлат), не менее-30 мг; Кофеин, не менее 10 мг. Вспомогательные вещества:Желатин*; диоксид кремния аморфный, магния стеарат; желтый оксид железа*, кандурин серебряный*; аспарагинат хрома; черный оксид железа*; декстроза. * — компоненты желатиновой капсулы.

Противопоказания

Индивидуальная непереносимость компонентов, беременность, кормление грудью, повышенная нервная возбудимость, повышенное артериальное давление, нарушение сердечного ритма, прием в вечернее время. Перед применением проконсультироваться с врачом. Не является лекарственным средством.

Условия хранения

Хранить в сухом, защищенном от света и недоступном для детей месте, при температуре не выше 25 °С.

Срок годности

720

Данный товар может поставляться сразу несколькими производителями. По этой причине информация отличаться. Соответствующие конкретному товару данные всегда представлены на этикетке. Внешний вид продукта в магазине также может отличаться от изображения на фото.

Solaray, Экстракт гуараны — Радость души и тела — ЖЖ

Гуарана –  известный природный энергетик, её  широко используют в различных добавках, напитках и др., применяют для повышения работоспособности и выносливости при физических нагрузках.

Вот именно в поисках «чего-нибудь для энергии» я когда-то и решила попробовать гуарану. Расскажу о своих впечатлениях

Сейчас можно купить со скидкой 15%

* В наличии для России осталось буквально несколько штук

Вкратце о гуаране:

— источник натурального кофеина, традиционно используемый для повышения уровня энергии.
— помогает поддерживать ясность ума и способность удерживать внимание.
В отличие от кофеина, который можно получить из кофейных зерен, гуарана действует более длительное время.

Для знакомства я выбрала этот вариант:

Solaray Guarana, Экстракт семян гуараны, 200 мг, 60 растительных капсул – ссылка

Из описания:
Гуарана — вьющееся растение из семейства кленовых, произрастающих в Южной Америке. Коренные племена Амазонки представили семена европейским колонизаторам в 16 веке. Гуарана может обеспечить питательную поддержку энергии и ясности ума. Этот продукт содержит натуральный кофеин, эквивалентный примерно 1/2 чашки кофе.
Без ГМО, 100% веганский
Гарантированная эффективность

Дозировка указана на одну капсулу.
В составе:
Гуарана (экстракт семян, гарантированно содержит 44 мг (22%) кофеина)  — 200 мг
Гурана   (семена) — 100 мг
Капсулы обычного размера, не огромные. Проглатываются без проблем.

В отзывах, которые мне попадались на гуарану вообще (не именно Соларэй), вычитала немало интересного. Опыт у всех, разумеется, был свой, но кому-то она помогала чуть ли не горы свернуть. Положительный опыт других, как обычно, придает уверенности, вместе с тем, я всегда осознаю, что эффект может отличаться.

Результат в моем случае оказался не взрывным, скорее мягким, но четким, и мне это нравится. Для меня гуарана стала отличным помощником в случаях, когда ощущается вялость и сонливость и просто необходимо взбодрить себя чем-нибудь, чтоб не засыпать на ходу и продолжать работать. Кофе мне обычно помогает очухаться совсем ненадолго, а вот добавки действуют лучше. Гуарана на самом деле дает ощущение тонуса,  одновременно  пробуждает желание что-то делать, даже соображается лучше. Принимаю в дни, когда понимаю, что дел у меня вагон и маленькая тележка, и сил, запала на все может и не хватить.

Если сравнить с макой, которую я очень люблю (здесь мой отзыв о добавке)– ощущения от приема несколько отличаются. Гуарана действует чуть быстрее и ярче, а после маки общее состояние более ровное.  Но это только мой опыт, конечно. Думаю, можно было и не отмечать, что все индивидуально.
Еще интересный факт – в результате активного расходования энергии, гуарана способна стимулировать организм  использовать собственные жировые отложения. Это я проверить не могу, но думаю, это вообще логично.

Буду рада, если отзыв пригодится.
Все мои записи в сообществе  — ЗДЕСЬ

Мой код в Айхерб ZAJ972 (скидка 5% на любой заказ), благодарю за применение 🙂

По теме поста:

Средство для выносливости Prince of Peace, Ультра Гингко Плюс

СКИДКА 15%

Идеальный вариант — Оптимизированный цинк  Solaray, OptiZinc, 30 мг


KAL, ГАМК, L-теанин, таблетки Stress B, натуральный аромат манго и танжерина

Тоже со СКИДКОЙ 15%

Шипучки для иммунитета Trace Minerals Research, Max Hydrate Immunity


Суперфуд, афродизиак, помощник при хронической усталости — Now Foods Необработанная мака


Для спокойствия и настроения «прямо сейчас» — Zhou Nutrition, Calm Now

.

Обзор, применение, побочные эффекты, меры предосторожности, взаимодействие, дозировка и обзоры

Арнольд, М.Е., Петрос, ТВ, Беквит, Б.Е., Кунс, Г. и Горман, Н. Влияние кофеина, импульсивности и секса на память для списков слов. Физиол Поведение. 1987;41(1):25-30. Посмотреть реферат.

Арья, Л. А., Майерс, Д. Л., и Джексон, Н. Д. Потребление кофеина с пищей и риск нестабильности детрузора: исследование случай-контроль. Акушер.Гинекол. 2000;96(1):85-89. Посмотреть реферат.

Аструп А., Тубро С., Кэннон С., Хайн П., Бреум Л. и Мэдсен Дж. Кофеин: двойное слепое плацебо-контролируемое исследование его термогенных, метаболических и сердечно-сосудистых эффектов у здоровых добровольцев. Am.J.Clin.Nutr. 1990;51(5):759-767. Посмотреть реферат.

Avato, P., Pesante, M.A., Fanizzi, F.P., and Santos, C.A. Состав масла семян Paullinia cupana var. sorbilis (Mart.) Ducke. Липиды 2003;38(7):773-780. Посмотреть реферат.

Багхани, Л. и Джафари, М. Побочные реакции со стороны сердечно-сосудистой системы, связанные с гуараной: есть ли причинно-следственная связь? Дж.Herb.Pharmaother. 2002;2(1):57-61. Посмотреть реферат.

Barbour, KE, Zmuda, JM, Strotmeyer, ES, Horwitz, MJ, Boudreau, R. , Evans, RW, Ensrud, KE, Petit, MA, Gordon, CL, and Cauley, JA Корреляты трабекулярной и кортикальной объемной кости минеральная плотность лучевой кости и большеберцовой кости у пожилых мужчин: исследование остеопоротических переломов у мужчин. J Bone Miner.Res 2010;25(5):1017-1028. Посмотреть реферат.

Belliardo, F., Martelli, A., and Valle, M.G. Определение кофеина и теофиллина методом ВЭЖХ в Paullinia cupana Kunth (гуарана) и Cola spp.образцы. З.Лебенсм.Унтерс.Форш. 1985;180(5):398-401. Посмотреть реферат.

Bempong DK, Houghton PJ и Steadman K. Содержание ксантина в гуаране и ее препаратах. Int J Pharmacog 1993;31(3):175-181.

Бенони Х., Даллакян П. и Тараз К. Исследования эфирного масла гуараны. З.Лебенсм.Унтерс.Форш. 1996;203(1):95-98. Посмотреть реферат.

Биркетт, Н. Дж. и Логан, А. Г. Напитки, содержащие кофеин, и распространенность гипертонии. J Hypertens.Suppl 1988;6(4):S620-S622.Посмотреть реферат.

Брайс С. и Смит А. Влияние кофеина на симуляцию вождения, субъективную бдительность и устойчивое внимание. Hum Psychopharmacol Clin Exp 2001;16(7):523-531.

Bryant, C.M., Dowell, C.J., and Fairbrother, G. Обучение снижению потребления кофеина для улучшения симптомов мочеиспускания. Бр.Дж.Нурс. 4-25-2002;11(8):560-565. Посмотреть реферат.

Бушеми С., Верга С., Батсис Дж. А., Донателли М., Транчина М. Р., Бельмонте С., Маттина А., Ре А. и Черасола Г.Острые эффекты кофе на эндотелиальную функцию у здоровых людей. Eur.J Clin Nutr. 2010;64(5):483-489. Посмотреть реферат.

Bydlowski, S.P., D’Amico, E.A., и Chamone, D.A. Водный экстракт гуараны (Paullinia cupana) снижает синтез тромбоксана тромбоцитами. Braz.J.Med.Biol.Res. 1991;24(4):421-424. Посмотреть реферат.

Быдловски С.П., Юнкер Р.Л. и Суббиа М.Т. Новое свойство водного экстракта гуараны (Paullinia cupana): ингибирование агрегации тромбоцитов in vitro и in vivo.Braz.J.Med.Biol.Res. 1988;21(3):535-538. Посмотреть реферат.

Caballero, T., Garcia-Ara, C., Pascual, C., Diaz-Pena, J.M., и Ojeda, A. Крапивница, вызванная кофеином. J.Investig.Аллергол.Клин Иммунол. 1993;3(3):160-162. Посмотреть реферат.

Casiglia, E., Bongiovi, S., Paleari, CD, Petucco, S., Boni, M., Colangeli, G., Penzo, M., and Pessina, AC Гемодинамические эффекты кофе и кофеина у здоровых добровольцев: плацебо-контролируемое клиническое исследование. J.Intern.Med. 1991;229(6):501-504.Посмотреть реферат.

Chamone, D.A., Silva, M.I., Cassaro, C., Bellotti, G., Massumoto, C.M., and Fujimura, A.Y. Гуарана (Paullinia cupana) ингибирует агрегацию в цельной крови. Тромбоз и гемостаз 1987;58(1):474.

Chroscinska-Krawczyk, M., Ratnaraj, N., Patsalos, P.N., and Czuczwar, SJ. Влияние кофеина на противосудорожное действие окскарбазепина, ламотриджина и тиагабина на мышиной модели генерализованных тонико-клонических припадков. Pharmacol Rep. 2009;61(5):819-826.Посмотреть реферат.

Clausen, T. Гормональная и фармакологическая модификация гомеостаза калия в плазме. Fundam.Clin Pharmacol 2010;24(5):595-605. Посмотреть реферат.

Конлиск, А. Дж. и Галуска, Д. А. Связан ли кофеин с минеральной плотностью костей у молодых взрослых женщин?. Прев.Мед. 2000;31(5):562-568. Посмотреть реферат.

Куратоло П. В. и Робертсон Д. Влияние кофеина на здоровье. Энн.Интерн.Мед. 1983; 98 (5 часть 1): 641-653. Посмотреть реферат.

де Оливейра, Дж.Ф., Авила А.С., Брага А.С., де Оливейра М.Б., Боаскевиск Э.М., Жалес Р.Л., Кардосо В.Н. и Бернардо-Фильо М. Влияние экстракта лекарственных растений на мечение элементов крови технецием- 99m и по морфологии эритроцитов: I — исследование с Paullinia cupana. Фитотерапия 2002;73(4):305-312. Посмотреть реферат.

Дебра К., Хей Р., Шервин Р., Мерфи Дж. и Керр Д. Влияние острого и хронического употребления кофеина на цереброваскулярные, сердечно-сосудистые и гормональные реакции на ортостаз у здоровых добровольцев.Clin Sci (Colch.) 1995;89(5):475-480. Посмотреть реферат.

Дрю А.К. и Доусон А.Х. Herbal xtreme: острая токсичность, связанная с внутривенным введением гуараны [аннотация]. Журнал токсикологии — Клиническая токсикология 2000;38(2):235-236.

du, Boisgueheneuc F., Lannuzel, A., Caparros-Lefebvre, D. и De Broucker, T. [Инфаркт головного мозга у пациента, принимающего экстракт MaHuang и гуарану]. Presse Med 2-3-2001;30(4):166-167. Посмотреть реферат.

Эрнест Д., Чиа М. и Коралло К.E. Глубокая гипокалиемия вследствие неправильного применения Нурофена Плюс и Ред Булл. Критическая помощь Resusc. 2010;12(2):109-110. Посмотреть реферат.

Фараг, Н. Х., Уитсетт, Т. Л., Макки, Б. С., Уилсон, М. Ф., Винсент, А. С., Эверсон-Роуз, С. А., и Ловалло, В. Р. Кофеин и реакция артериального давления: пол, возраст и гормональный статус. J Womens Health (Larchmt.) 2010;19(6):1171-1176. Посмотреть реферат.

Fotherby, M.D., Ghandi, C., Haigh, R.A., Macdonald, T.A., and Potter, J.F. Длительное употребление кофеина не оказывает прессорного эффекта на пожилых людей.Кардиология пожилых людей 1994;2(6):499-503.

Гальдуроз, Дж. К. и Карлини, Э. А. Влияние длительного приема гуараны на познание нормальных пожилых добровольцев. Сан-Паулу Мед.Дж. 1996;114(1):1073-1078. Посмотреть реферат.

Galduroz, JC и Carlini, Ede A. Острое воздействие Paulinia cupana, «Guarana» на познание нормальных добровольцев. Сан-Паулу Мед.Дж. 1994;112(3):607-611. Посмотреть реферат.

Халлер, К.А., Джейкоб, П. и Беновиц, Н.Л.Краткосрочные метаболические и гемодинамические эффекты комбинаций эфедры и гуараны. Клин.Фармакол.Тер. 2005;77(6):560-571. Посмотреть реферат.

Хансен, С. А., Фолсом, А. Р., Куши, Л. Х., и Селлерс, Т. А. Связь переломов с кофеином и алкоголем у женщин в постменопаузе: исследование здоровья женщин в Айове. Нутр общественного здравоохранения. 2000;3(3):253-261. Посмотреть реферат.

Джамал, С. А., Свон, В. Дж., Браун, Дж. П., Хэнли, Д. А., Прайор, Дж. К., Папайоанноу, А., Лангсетмо, Л., и Хоссе, Р.G. Функция почек и скорость потери костной массы в области тазобедренного сустава и позвоночника: Канадское многоцентровое исследование остеопороза. Am J почек Dis. 2010;55(2):291-299. [ОТМЕНЕНО]. Посмотреть реферат.

Джа, Р. М., Митхал, А., Малхотра, Н., и Браун, Э. М. Пилотное исследование факторов риска переломов шейки бедра у городского населения Индии методом случай-контроль. BMC.Опорно-двигательный аппарат.Расстройство. 2010;11:49. Посмотреть реферат.

Kennedy, D. O., Haskell, C. F., Wesnes, K. A., and Scholey, A. B. Улучшение когнитивных функций у людей-добровольцев после введения экстракта гуараны (Paullinia cupana): сравнение и взаимодействие с женьшенем Panax.Pharmacol Biochem Behav 2004;79(3):401-411. Посмотреть реферат.

Кеухель И., Конен Р. и Линерт Г. А. Влияние алкоголя и кофеина на результаты теста на концентрацию. Арцнаймиттельфоршунг. 1979;29(6):973-975. Посмотреть реферат.

Ллойд Т., Роллингс Н., Эггли Д. Ф., Кизельхорст К. и Чинчилли В. М. Потребление кофеина с пищей и состояние костей у женщин в постменопаузе. Am.J.Clin.Nutr. 1997;65(6):1826-1830. Посмотреть реферат.

Маккензи Т. , Коми Р., Слусс П., Кейсари Р., Манвар С., Ким Дж., Ларсон Р. и Барон Дж. А. Метаболические и гормональные эффекты кофеина: рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое перекрестное исследование. Метаболизм 2007;56(12):1694-1698. Посмотреть реферат.

Маркс, Ф. и др. Анализ гуараны (

Mattei, R., Dias, RF, Espinola, EB, Carlini, EA, и Barros, SB Guarana (Paullinia cupana): токсические поведенческие эффекты у лабораторных животных и антиоксидантная активность in vitro. J.Ethnopharmacol. 1998 ;60(2):111-116.Посмотреть реферат.

Moisey, L.L., Robinson, L.E., and Graham, T.E. Потребление кофе с кофеином и пищи с высоким содержанием углеводов влияет на постпрандиальный метаболизм последующего перорального теста на толерантность к глюкозе у молодых здоровых мужчин. Бр.Дж. Нутр. 2010;103(6):833-841. Посмотреть реферат.

Морано А., Хименес-Хименес Ф. Дж., Молина Дж. А. и Антолин М. А. Факторы риска болезни Паркинсона: исследование случай-контроль в провинции Касерес, Испания. Acta Neurol.Scand 1994;89(3):164-170.Посмотреть реферат.

Морт, Дж. Р. и Крузе, Х. Р. Время измерения артериального давления, связанное с потреблением кофеина. Энн Фармакотер. 2008;42(1):105-110. Посмотреть реферат.

Ороско-Грегорио, Х., Мота-Рохас, Д., Бонилья-Хайме, Х., Трухильо-Ортега, М.Э., Бесеррил-Эррера, М., Эрнандес-Гонсалес, Р., и Вильянуэва-Гарсия, Д. Влияние введения кофеина на метаболические показатели у новорожденных свиней с перинатальной асфиксией. Am.J Vet.Res. 2010;71(10):1214-1219. Посмотреть реферат.

Pappa, HM, Saslowsky, TM, Filip-Dhima, R., DiFabio, D., Lahsinoui, HH, Akkad, A., Grand, RJ, and Gordon, CM Эффективность и вред назального кальцитонина для улучшения плотности костной ткани у молодые пациенты с воспалительным заболеванием кишечника: рандомизированное плацебо-контролируемое двойное слепое исследование. Am J Гастроэнтерол. 2011;106(8):1527-1543. Посмотреть реферат.

Pola, J., Subiza, J., Armentia, A., Zapata, C., Hinojosa, M. , Losada, E., и Valdivieso, R. Крапивница, вызванная кофеином.Ann.Allergy 1988;60(3):207-208. Посмотреть реферат.

Куинлан П., Лейн Дж. и Аспиналл Л. Влияние горячего чая, кофе и воды на физиологические реакции и настроение: роль кофеина, воды и типа напитка. Психофармакология (Берл) 1997;134(2):164-173. Посмотреть реферат.

Квирс Г.С., Фрейре П., Фернандес Р.М., Давила И. и Лосада Э. Крапивница от кофеина. J.Allergy Clin Immunol. 1991;88(4):680-681. Посмотреть реферат.

Ригато И., Бларасин Л.и Кетте Ф. Тяжелая гипокалиемия у 2 молодых велосипедистов из-за массивного приема кофеина. Клин Джей Спорт Мед. 2010;20(2):128-130. Посмотреть реферат.

Робелин, М. и Роджерс, П. Дж. Влияние на настроение и психомоторные функции первой, но не последующей дозы кофеина, эквивалентной чашке кофе, употребленной после ночного воздержания от кофеина. Behav.Pharmacol 1998;9(7):611-618. Посмотреть реферат.

Робертс А. Т., Йонге-Левитан Л., Паркер К. С. и Гринуэй Ф. Влияние травяной добавки, содержащей черный чай и кофеин, на метаболические параметры человека. Altern Med Rev 2005;10(4):321-325. Посмотреть реферат.

Робертсон Д., Фролич Дж. К., Карр Р. К., Уотсон Дж. Т., Холлифилд Дж. В., Шанд Д. Г. и Оутс Дж. А. Влияние кофеина на активность ренина плазмы, катехоламины и кровяное давление. N.Engl.J Med. 1-26-1978; 298(4):181-186. Посмотреть реферат.

Роджерс, П. Дж. и Дернонкур, К. Регулярное потребление кофеина: баланс побочных и полезных эффектов на настроение и психомоторную деятельность. Pharmacol Biochem.Behav. 1998;59(4):1039-1045.Посмотреть реферат.

Сальвадори, М. С., Ризер, Э. М., Рибейро Нето, Л. М., и Насименто, Э. С. Определение ксантинов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии и тонкослойной хроматографии в лошадиной моче после приема внутрь порошка гуараны. Аналитик 1994;119(12):2701-2703. Посмотреть реферат.

Sicard, B. A., Perault, M. C., Enslen, M., Chauffard, F., Vandel, B. и Tachon, P. Влияние 600 мг кофеина с медленным высвобождением на настроение и бдительность. Авиа.Спейс Энвайрон. Мед. 1996;67(9):859-862.Посмотреть реферат.

Simmonds, M.J., Minahan, C.L., и Sabapathy, S. Кофеин улучшает супрамаксимальные циклы, но не скорость анаэробного выделения энергии. Eur.J Appl Physiol 2010;109(2):287-295. Посмотреть реферат.

Смит А. П., Кендрик А. М. и Мабен А. Л. Влияние завтрака и кофеина на работоспособность и настроение поздним утром и после обеда. Нейропсихобиология 1992;26(4):198-204. Посмотреть реферат.

Смитс, П., Корстенс, Ф. Х., Энгеварен, В. Р., Вакерс, Ф.J., и Thien, T. Ложноотрицательная дипиридамол-таллий-201 визуализация миокарда после инфузии кофеина. J Nucl.Med. 1991;32(8):1538-1541. Посмотреть реферат.

Смитс, П., Темме, Л., и Тиен, Т. Сердечно-сосудистое взаимодействие между кофеином и никотином у людей. Clin Pharmacol Ther 1993;54(2):194-204. Посмотреть реферат.

Штейн М.А., Красовски М., Левенталь Б.Л., Филлипс В. и Бендер Б.Г. Поведенческие и когнитивные эффекты метилксантинов. Метаанализ теофиллина и кофеина.Arch. Pediatr.Adolesc.Med. 1996;150(3):284-288. Посмотреть реферат.

Сунг, Б.Х., Уитсетт, Т.Л., Ловалло, В.Р., аль’Абси, М., Пинкомб, Г.А., и Уилсон, М.Ф. Длительное повышение артериального давления при однократном приеме внутрь дозы кофеина у мужчин с легкой гипертонией. Am.J гипертензии. 1994;7(8):755-758. Посмотреть реферат.

Waugh, EJ, Lam, MA, Hawker, GA, McGowan, J., Papaioannou, A., Cheung, AM, Hodsman, AB, Leslie, WD, Siminoski, K., and Jamal, SA Факторы риска низкой костной ткани массы у здоровых женщин 40-60 лет: систематический обзор литературы.Остеопорос.Инт. 2009;20(1):1-21. Посмотреть реферат.

Wrenn, K.D. и Oschner, I. Рабдомиолиз, вызванный передозировкой кофеина. Энн.Эмерг.Мед. 1989;18(1):94-97. Посмотреть реферат.

Ю. Г., Маскрей В., Джексон С. Х., Свифт К. Г. и Типлади Б. Сравнение эффектов кофеина и теофиллина на центральную нервную систему у пожилых людей. Br.J Clin Pharmacol 1991;32(3):341-345. Посмотреть реферат.

Абернети Д.Р., Тодд Э. Л. Нарушение клиренса кофеина при постоянном использовании низких доз эстрогенсодержащих пероральных контрацептивов.Eur J Clin Pharmacol 1985; 28:425-8. Посмотреть реферат.

Ачесон К.Дж., Гремо Г., Мейрим И. и др. Метаболические эффекты кофеина у человека: окисление липидов или бесполезный цикл? Ам Дж. Клин Нутр 2004; 79:40-6. Посмотреть реферат.

Али М., Афзал М. Мощный ингибитор тромбин-стимулированного образования тромбоксана тромбоцитами из необработанного чая. Простагландины Leukot Med 1987;27:9-13. Посмотреть реферат.

Американская академия педиатрии. Попадание наркотиков и других химических веществ в грудное молоко.Педиатрия 2001;108:776-89. Посмотреть реферат.

Andersen T, Fogh J. Потеря веса и замедленное опорожнение желудка после южноамериканского травяного препарата у пациентов с избыточным весом. J Hum Nutr Diet 2001; 14: 243-50. Посмотреть реферат.

Акель Р.А., Зогби Г.Дж., Тримм Дж.Р. и др. Влияние кофеина, вводимого внутривенно, на коронарную гемодинамику, вызванную интракоронарным введением аденозина, у пациентов с ишемической болезнью сердца. Am J Cardiol 2004; 93: 343-6. Посмотреть реферат.

Ардли Н.Г., Глю Г., Шульц Б.Г., Шварц С.Дж.Ингибирование и изменение агрегации тромбоцитов метилксантинами. Thromb Diath Haemorrh 1967;18:670-3. Посмотреть реферат.

Avisar R, Avisar E, Weinberger D. Влияние потребления кофе на внутриглазное давление. Ann Pharmacother 2002;36:992-5.. Посмотреть аннотацию.

Бара А.И., Ячмень Е.А. Кофеин против астмы. Cochrane Database Syst Rev 2001;4:CD001112.. Посмотреть аннотацию.

Beach CA, Mays DC, Guiler RC, et al. Ингибирование выведения кофеина дисульфирамом у здоровых людей и выздоравливающих алкоголиков.Clin Pharmacol Ther 1986; 39:265-70. Посмотреть реферат.

Bell DG, Jacobs I, Ellerington K. Влияние приема кофеина и эфедрина на анаэробные упражнения. Медицинские научные спортивные упражнения 2001; 33: 1399-403. Посмотреть реферат.

Benowitz NL, Osterloh J, Goldschlager N, et al. Массивный выброс катехоламинов при отравлении кофеином. ЯМА 1982; 248:1097-8. Посмотреть реферат.

Boozer CN, Nasser JA, Heymsfield SB, et al. Травяная добавка, содержащая Ма Хуанг-Гуарану для похудения: рандомизированное двойное слепое исследование.Int J Obes Relat Metab Disord 2001; 25: 316-24. Посмотреть реферат.

Bourin M, Bougerol T, Guitton B, Broutin E. Комбинация растительных экстрактов в лечении амбулаторных пациентов с расстройством адаптации с тревожным настроением: контролируемое исследование по сравнению с плацебо. Fundam Clin Pharmacol 1997; 11:127-32. Посмотреть реферат.

Бракен М.Б., Трише Э.В., Белэнджер К. и др. Связь потребления кофеина матерью с замедлением роста плода. Am J Epidemiol 2003;157:456-66.. Посмотреть реферат.

Breum L, Pedersen JK, Ahlstrom F, et al.Сравнение комбинации эфедрина/кофеина и дексфенфлурамина при лечении ожирения. Двойное слепое многоцентровое исследование в общей практике. Int J Obes Relat Metab Disord 1994; 18: 99-103. Посмотреть реферат.

Бриггс Г.Б., Фриман Р.К., Яффе С.Дж. Лекарственные препараты при беременности и лактации. 5-е изд. Филадельфия, Пенсильвания: Липпинкотт Уильямс и Уилкинс; 1998.

Браун, Нью-Джерси, Райдер Д., Бранч РА. Фармакодинамическое взаимодействие между кофеином и фенилпропаноламином. Clin Pharmacol Ther 1991;50:363-71.Посмотреть реферат.

Cannon ME, Cooke CT, McCarthy JS. Сердечная аритмия, вызванная кофеином: непризнанная опасность продуктов здорового питания. Med J Aust 2001; 174: 520-1. Посмотреть реферат.

Карбо М., Сегура Дж., Де ла Торре Р. и др. Влияние хинолонов на утилизацию кофеина. Clin Pharmacol Ther 1989;45:234-40. Посмотреть реферат.

Carrillo JA, Benitez J. Клинически значимые фармакокинетические взаимодействия между диетическим кофеином и лекарствами. Clin Pharmacokinet 2000;39:127-53.Посмотреть реферат.

Чен Дж.Ф., Сюй К., Петцер Дж.П. и др. Нейропротекция кофеином и инактивацией аденозиновых рецепторов A(2A) на модели болезни Паркинсона. J Neurosci 2001;21:RC143.. Посмотреть аннотацию.

Чен, Ю., Сяо, CQ, Хе, Ю.Дж., Чен, Б.Л., Ван, Г., Чжоу, Г., Чжан, В., Тан, З.Р., Цао, С., Ван, Л.П., и Чжоу, HH Genistein изменяет воздействие кофеина на здоровых женщин-добровольцев. Eur.J Clin.Pharmacol. 2011;67(4):347-353. Посмотреть реферат.

Чиу КМ. Влияние добавок кальция на костную массу у женщин в постменопаузе.J Gerontol A Biol Sci Med Sci 1999;54:M275-80. Посмотреть реферат.

Чоу Т. Проснуться и почувствовать запах кофе. Кофеин, кофе и медицинские последствия. West J Med 1992; 157:544-53. Посмотреть реферат.

Chroscinska-Krawczyk, M., Jargiello-Baszak, M., Walek, M., Tylus, B., and Czuczwar, SJ. Кофеин и противосудорожная активность противоэпилептических препаратов: экспериментальные и клинические данные. Фармакол.Респ. 2011;63(1):12-18. Посмотреть реферат.

Цишовски К., Бидрон В., Гомолка Э.Острое отравление кофеином, приводящее к мерцательной аритмии после передозировки экстракта гуараны. Пшегль Лек. 2014;71(9):495-8. Посмотреть реферат.

Козма-Петрут А., Логин Ф., Миере Д., Думитраску Д.Л. Диета при синдроме раздраженного кишечника: что рекомендовать, а не запрещать пациентам! Мир J Гастроэнтерол. 2017;23(21):3771-3783. Посмотреть реферат.

da Costa Miranda V, Trufelli DC, Santos J, Campos MP, Nobuo M, da Costa Miranda M, Schlinder F, Riechelmann R, del Giglio A. Эффективность гуараны (Paullinia cupana) при постлучевой усталости и депрессии: результаты исследования пилотное двойное слепое рандомизированное исследование.J Altern Complement Med. 2009 апр; 15 (4): 431-3. Посмотреть реферат.

Daniel, W.A., Syrek, M., Rylko, Z. и Kot, M. Влияние фенотиазиновых нейролептиков на скорость деметилирования и гидроксилирования кофеина в печени крыс. Pol. J Pharmacol 2001;53(6):615-621. Посмотреть реферат.

de Oliveira Campos MP, Riechelmann R, Martins LC, Hassan BJ, Casa FB, Del Giglio А. Гуарана (Paullinia cupana) снижает усталость у больных раком молочной железы, проходящих системную химиотерапию. J Altern Complement Med.2011 июнь; 17 (6): 505-12. Посмотреть реферат.

del Giglio AB, Cubero Dde I, Lerner TG, Guariento RT, de Azevedo RG, Paiva H, Goldman C, Carelli B, Cruz FM, Schindler F, Pianowski L, de Matos LL, del Giglio A. Очищенный сухой экстракт Paullinia cupana (гуарана) (PC-18) при усталости, связанной с химиотерапией, у пациентов с солидными опухолями: исследование раннего прекращения. Приложение J диета. 2013 Декабрь; 10 (4): 325-34. Посмотреть реферат.

Дьюс П.Б., Кертис Г.Л., Хэнфорд К.Дж., О’Брайен К.П. Частота отмены кофеина в популяционном опросе и в контролируемом слепом пилотном эксперименте.J Clin Pharmacol 1999;39:1221-32. Посмотреть реферат.

Дьюс П.Б., О’Брайен С.П., Бергман Дж. Кофеин: поведенческие эффекты абстиненции и связанные с этим проблемы. Food Chem Toxicol 2002;40:1257-61. Посмотреть реферат.

Дреер ХМ. Влияние снижения потребления кофеина на качество сна и самочувствие у людей с ВИЧ. J Psychosom Res 2003;54:191-8.. Посмотреть аннотацию.

Электронный свод федеральных правил. Раздел 21. Часть 182. Вещества, общепризнанные безопасными. Доступно по адресу: https://www.accessdata.fda.gov/scripts/cdrh/cfdocs/cfcfr/CFRSearch.cfm?CFRPart=182

Эскенази Б. Кофеин — фильтрация фактов. N Engl J Med 1999;341:1688-9. Посмотреть реферат.

Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов. Предлагаемое правило: пищевые добавки, содержащие алкалоиды эфедрина. Доступно на: www.verity.fda.gov (по состоянию на 25 января 2000 г.).

Фернандес О., Сабхарвал М., Смайли Т. и др. Потребление кофеина от умеренного до сильного во время беременности и связь со спонтанным абортом и аномальным ростом плода: метаанализ.Reprod Toxicol 1998;12:435-44. Посмотреть реферат.

Ferrini RL, Barrett-Connor E. Потребление кофеина и уровень эндогенных половых стероидов у женщин в постменопаузе. Исследование Ранчо Бернардо. Am J Epidemiol 1996:144:642-4. Посмотреть реферат.

Для Дитера почти полная потеря. Вашингтон Пост. Доступно по адресу: https://www.washingtonpost.com/archive/politics/2000/03/19/for-dieter-nearly-the-ultimate-loss/c0f07474-489d-4f44-bc17-1f1367c956ae/ (по состоянию на 19 марта 2000 г.). ).

Форрест В. Х. младший, Беллвилл Дж. В., Браун Б. В. младший.Взаимодействие кофеина с пентобарбиталом как ночного снотворного. Анестезиология 1972;36:37-41. Посмотреть реферат.

Фур, У., Штробль, Г., Манаут, Ф., Андерс, Э.М., Зоргель, Ф., Лопес-де-Бринас, Э., Чу, Д.Т., Пернет, А.Г., Мар, Г., Санс, Ф., и. Хинолоновые антибактериальные агенты: связь между структурой и ингибированием in vitro изоформы цитохрома P450 человека CYP1A2. Мол.Фармакол. 1993;43(2):191-199. Посмотреть реферат.

Гасиор М., Борович К., Бушевич Г., Kleinrok, Z., and Czuczwar, SJ. Противосудорожная активность фенобарбитала и вальпроата против максимального электрошока у мышей во время хронического лечения кофеином и прекращения приема кофеина. Эпилепсия 1996;37(3):262-268. Посмотреть реферат.

Gasior, M., Swiader, M., Przybylko, M., Borowicz, K., Turski, WA, Kleinrok, Z., and Czuczwar, SJ Felbamate демонстрирует низкую склонность к взаимодействию с метилксантинами и модуляторами Ca2+ каналов при экспериментальных судорогах. у мышей.Eur.J Pharmacol 7-10-1998;352(2-3):207-214. Посмотреть реферат.

Горски, Дж. К., Хуанг, С. М., Пинто, А., Хамман, М. А., Хиллигосс, Дж. К., Захир, Н. А., Десаи, М., Миллер, М., и Холл, С. Д. Влияние эхинацеи (корень эхинацеи пурпурной) на активность цитохрома Р450 in vivo. Клин Фармакол Тер. 2004;75(1):89-100. Посмотреть реферат.

Grandjean AC, Reimers KJ, Bannick KE, Haven MC. Влияние напитков с кофеином, без кофеина, калорийных и некалорийных на гидратацию. J Am Coll Nutr 2000; 19: 591-600.. Посмотреть реферат.

Гринуэй, Флорида, Раум В.Дж., ДеЛани, JP. Влияние травяной пищевой добавки, содержащей эфедрин и кофеин, на потребление кислорода у людей. J Altern Complement Med 2000; 6: 553-5. Посмотреть реферат.

Hagg S, Spigset O, Mjorndal T, Dahlqvist R. Влияние кофеина на фармакокинетику клозапина у здоровых добровольцев. Бр Дж. Клин Фармакол 2000;49:59-63. Посмотреть реферат.

Халлер К.А., Беновиц Н.Л., Джейкоб П. 3-й. Гемодинамические эффекты добавок для похудения без эфедры у людей.Am J Med 2005;118:998-1003.. Посмотреть реферат.

Haller CA, Benowitz NL. Нежелательные явления со стороны сердечно-сосудистой системы и центральной нервной системы, связанные с приемом пищевых добавок, содержащих алкалоиды эфедры. N Engl J Med 2000;343:1833-8. Посмотреть реферат.

Haller CA, Jacob P 3rd, Benowitz NL. Фармакология алкалоидов эфедры и кофеина после однократного приема пищевой добавки. Clin Pharmacol Ther 2002;71:421-32. Посмотреть реферат.

Harder S, Fuhr U, Staib AH, Wolff T. Ципрофлоксацин-кофеин: лекарственное взаимодействие, установленное с помощью исследований in vivo и in vitro.Am J Med 1989; 87:89S-91S. Посмотреть реферат.

Харттер С., Нордмарк А., Роуз Д. М., Бертилссон Л., Тайбринг Г. и Лейн К. Влияние потребления кофеина на фармакокинетику мелатонина, пробного препарата для активности CYP1A2. Бр.Дж.Клин.Фармакол. 2003;56(6):679-682. Посмотреть реферат.

Haskell CF, Kennedy DO, Wesnes KA, Milne AL, Scholey AB. Двойная слепая, плацебо-контролируемая, многодозовая оценка острых поведенческих эффектов гуараны у людей. Дж Психофармакол. 2007 Январь; 21 (1): 65-70.Посмотреть реферат.

Healy DP, Polk RE, Kanawati L, et al. Взаимодействие между пероральным ципрофлоксацином и кофеином у здоровых добровольцев. Противомикробные агенты Chemother 1989;33:474-8. Посмотреть реферат.

Ходжсон Дж. М., Падди И. Б., Берк В. и др. Влияние на артериальное давление употребления зеленого и черного чая. Дж. Гипертенс 1999; 17:457-63. Посмотреть реферат.

Холмгрен П., Норден-Петтерссон Л., Алнер Дж. Смертность от кофеина — четыре случая. Международная судебная экспертиза 2004; 139:71-3. Посмотреть реферат.

Хорнер Н.К., Лампе Дж.В. Потенциальные механизмы диетотерапии при фиброзно-кистозных состояниях молочной железы не имеют достаточных доказательств эффективности. J Am Diet Assoc 2000;100:1368-80. Посмотреть реферат.

Хауэлл Л.Л., Коффин В.Л., Спилмен Р.Д. Поведенческие и физиологические эффекты ксантинов у нечеловеческих приматов. Психофармакология (Берл) 1997; 129:1-14. Посмотреть реферат.

Инфанте С., Баеза М.Л., Кальво М. и др. Анафилаксия из-за кофеина. Аллергия 2003;58:681-2. Посмотреть реферат.

Медицинский институт.Кофеин для поддержания умственной деятельности: составы для военных операций. Вашингтон, округ Колумбия: National Academy Press, 2001. Доступно по адресу: https://books.nap.edu/books/030

87/html/index.html.

Jankiewicz, K., Chroscinska-Krawczyk, M., Blaszczyk, и Czuczwar, SJ [Кофеин и противоэпилептические препараты: экспериментальные и клинические данные]. Пшегл.Лек. 2007;64(11):965-967. Посмотреть реферат.

Джефферсон Дж.В. Литиевый тремор и употребление кофеина: два случая меньше пить и больше трястись.Дж. Клин Психиатрия 1988; 49:72-3. Посмотреть реферат.

Джорес Р., Клинкер Х. , Хойслер Х. и др. Влияние мексилетина на элиминацию кофеина. Pharmacol Ther 1987; 33:163-9. Посмотреть реферат.

Джулиано Л.М., Гриффитс Р.Р. Критический обзор отказа от кофеина: эмпирическая проверка симптомов и признаков, заболеваемости, тяжести и связанных с ними особенностей. Психофармакология (Берл) 2004;176:1-29. Посмотреть реферат.

Камимори Г.Х., Пенетар Д.М., Хедли Д.Б. и др. Влияние трех доз кофеина на катехоламины плазмы и бдительность во время длительного бодрствования.Eur J Clin Pharmacol 2000;56:537-44.. Посмотреть реферат.

Кеннеди Д.О., Хаскелл С.Ф., Робертсон Б., Рей Дж., Брюстер-Маунд С., Людеманн Дж., Маггини С., Руф М., Зангара А., Шоли А.Б. Улучшение когнитивных функций и умственной усталости после приема поливитаминов и минералов с добавлением гуараны (Paullinia cupana). Аппетит. 2008 март-май;50(2-3):506-13. Посмотреть реферат.

Клебанофф М.А., Левин Р.Дж., ДерСимонян Р. и др. Параксантин материнской сыворотки, метаболит кофеина, и риск самопроизвольного аборта. N Engl J Med 1999; 341:1639-44. Посмотреть реферат.

Коклер Д.Р., Маккарти М.В., Лоусон К.Л. Судорожная активность и отсутствие реакции после приема гидроксиката. Фармакотерапия 2001;21:647-51.. Посмотреть реферат.

Кот, М. и Даниэль, В. А. Влияние диэтилдитиокарбамата (ДДК) и тиклопидина на активность CYP1A2 и метаболизм кофеина: сравнительное исследование in vitro с экспрессией кДНК человека CYP1A2 и микросомами печени. Pharmacol Rep. 2009;61(6):1216-1220. Посмотреть реферат.

Кынаст-Галес С.А., Мэсси Л.К.Влияние кофеина на циркадную экскрецию кальция и магния с мочой. J Am Coll Nutr. 1994; 13:467-72. Посмотреть реферат.

Lake CR, Rosenberg DB, Gallant S, et al. Фенилпропаноламин повышает уровень кофеина в плазме. Clin Pharmacol Ther 1990;47:675-85. Посмотреть реферат.

Lane JD, Barkauskas CE, Surwit RS, Feinglos MN. Кофеин нарушает метаболизм глюкозы при диабете 2 типа. Лечение диабета 2004; 27:2047-8. Посмотреть реферат.

Лесон С.Л., МакГиган М. А., Брайсон С.М. Передозировка кофеина у подростка.J Toxicol Clin Toxicol 1988;26:407-15. Посмотреть реферат.

Лю, Т. Т. и Лиау, Дж. Кофеин увеличивает линейность визуального ответа BOLD. Нейроизображение. 2-1-2010;49(3):2311-2317. Посмотреть реферат.

Ллойд Т., Джонсон-Роллингс Н., Эггли Д.Ф. и др. Состояние костей у женщин в постменопаузе с различным привычным потреблением кофеина: продольное исследование. J Am Coll Nutr 2000; 19: 256-61. Посмотреть реферат.

Лущки Ю. Ю., Зухора М., Савицка К. М., Козинская Ю., и Czuczwar, SJ. Острое воздействие кофеина снижает противосудорожное действие этосуксимида, но не клоназепама, фенобарбитала и вальпроата против вызванных пентетразолом судорог у мышей. Pharmacol Rep. 2006;58(5):652-659. Посмотреть реферат.

Mansi IA, Huang J. Рабдомиолиз в ответ на фитотерапию для похудения. Am J Med Sci 2004; 327:356-357. Посмотреть реферат.

Мэсси Л.К., Уайтинг С.Дж. Кофеин, кальций в моче, метаболизм кальция и кости. Дж. Нутр 1993; 123:1611-4.Посмотреть реферат.

Мэсси Л.К. Является ли кофеин фактором риска потери костной массы у пожилых людей? Ам Дж. Клин Нутр 2001; 74: 569-70. Посмотреть реферат.

May DC, Jarboe CH, VanBakel AB, Williams WM. Влияние циметидина на утилизацию кофеина у курильщиков и некурящих. Clin Pharmacol Ther 1982; 31:656-61. Посмотреть реферат.

Mays, D.C., Camisa, C., Cheney, P., Pacula, C.M., Nawoot, S. и Gerber, N. Метоксален является мощным ингибитором метаболизма кофеина у людей. клин.Фармакол.Тер. 1987;42(6):621-626. Посмотреть реферат.

McGowan JD, Altman RE, Kanto WP Jr. Неонатальные абстинентные симптомы после длительного приема матерью кофеина. South Med J 1988;81:1092-4.. Посмотреть реферат.

Местер Р., Торен П., Мизрахи И. и др. Отказ от кофеина повышает уровень лития в крови. Биол Психиатрия 1995;37:348-50. Посмотреть реферат.

Мохиуддин, М., Азам, А. Т., Амран, М. С., и Хоссейн, М. А. Влияние гликлазида и метформина на концентрацию кофеина в плазме у здоровых крыс in vivo. Pak.J Biol Sci 5-1-2009;12(9):734-737. Посмотреть реферат.

Мустакас Д., Меццио М., Родригес Б.Р., Констебль М.А., Маллиган М.Э., Вура Э.Б. Гуарана обеспечивает дополнительную стимуляцию по сравнению с одним только кофеином в модели планарии. ПЛОС Один. 16 апреля 2015 г .; 10 (4): e0123310. Посмотреть реферат.

Наврот П., Джордан С., Иствуд Дж. и др. Влияние кофеина на здоровье человека. Пищевые добавки Contam 2003; 20:1-30. Посмотреть реферат.

Nehlig A, Debry G. Последствия хронического потребления кофе матерью во время беременности и лактации для новорожденных: обзор.J Am Coll Nutr 1994;13:6-21.. Посмотреть аннотацию.

Нгуен С., Райфер Дж., Шахин М. Безопасность и эффективность ежедневного приема Ревактина у мужчин с эректильной дисфункцией: 3-месячное пилотное исследование. Перевод Андрол Урол. 2018;7(2):266-73. Посмотреть реферат.

Никс Д., Зеленицкий С., Саймондс В. и др. Влияние флуконазола на фармакокинетику кофеина у молодых и пожилых людей. Clin Pharmacol Ther 1992; 51:183.

Norager, CB, Jensen, MB, Weimann, A. и Madsen, MR. Метаболические эффекты употребления кофеина и физической работы у 75-летних граждан.Рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое перекрестное исследование. Clin Endocrinol (Oxf) 2006;65(2):223-228. Посмотреть реферат.

Nurminen ML, Niittynen L, Korpela R, Vapaatalo H. Кофе, кофеин и кровяное давление: критический обзор. Eur J Clin Nutr 1999; 53:831-9. Посмотреть реферат.

Palma CG, Lera AT, Lerner T, de Oliveira MM, de Borta TM, Barbosa RP, Brito GM, Guazzelli CA, Cruz FJ, del Giglio A. Guarana (Paullinia cupana) улучшает анорексию у пациентов с запущенным раком.Приложение J диета. 2016;13(2):221-31. Посмотреть реферат.

Петри Х.Дж., Чоун С.Е., Белфи Л.М. и др. Прием кофеина увеличивает инсулиновую реакцию на пероральный тест на толерантность к глюкозе у мужчин с ожирением до и после потери веса. Ам Дж. Клин Нутр 2004; 80: 22–8. Посмотреть реферат.

Поллок Б. Г., Уайли М., Стэк Дж.А. и др. Ингибирование метаболизма кофеина заместительной терапией эстрогенами у женщин в постменопаузе. J Clin Pharmacol 1999;39:936-40. Посмотреть реферат.

Помпортес Л., Давранш К., Брисвальтер И., Хейс А., Брисволтер Дж.Вариабельность сердечного ритма и когнитивная функция после приема поливитаминов и минералов с добавлением гуараны (Paullinia cupana). Питательные вещества. 2014 г., 31 декабря; 7(1):196–208. Посмотреть реферат.

Рааска К., Райтасуо В., Лайтила Дж., Нойвонен П.Дж. Влияние кофеина, содержащего кофеин, по сравнению с кофе без кофеина на концентрацию клозапина в сыворотке крови у госпитализированных пациентов. Basic Clin Pharmacol Toxicol 2004; 94:13-8. Посмотреть реферат.

Rapuri PB, Gallagher JC, Kinyamu HK, Ryschon KL. Потребление кофеина увеличивает скорость потери костной массы у пожилых женщин и взаимодействует с генотипами рецепторов витамина D.Ам Дж. Клин Нутр 2001; 74: 694-700. Посмотреть реферат.

Рис К., Аллен Д. , Ладер М. Влияние возраста и кофеина на психомоторные и когнитивные функции. Психофармакология (Берл) 1999;145:181-8. Посмотреть реферат.

Робинсон Л.Е., Савани С., Баттрам Д.С. и др. Употребление кофеина перед пероральным тестом на толерантность к глюкозе ухудшает контроль уровня глюкозы в крови у мужчин с диабетом 2 типа. Дж. Нутр 2004; 134: 2528-33. Посмотреть реферат.

Росс Г.В., Эбботт Р.Д., Петрович Х. и др. Связь употребления кофе и кофеина с риском развития болезни Паркинсона.ДЖАМА 2000; 283:2674-9. Посмотреть реферат.

Sanderink GJ, Bournique B, Stevens J, et al. Участие изоферментов CYP1A человека в метаболизме и лекарственных взаимодействиях рилузола in vitro. Pharmacol Exp Ther 1997; 282:1465-72. Посмотреть реферат.

Савиц Д.А., Чан Р.Л., Херринг А.Х. и др. Кофеин и риск выкидыша. Эпидемиология 2008;19:55-62. Посмотреть реферат.

Шехтер, доктор медицины, Тиммонс, доктор медицины. Объективно измеренная гиперактивность — II. Эффекты кофеина и амфетамина. J Clin Pharmacol 1985; 25:276-80.. Посмотреть реферат.

Scholey A, Bauer I, Neale C, Savage K, Camfield D, White D, Maggini S, Pipingas A, Stough C, Hughes M. Острые эффекты различных поливитаминных минеральных препаратов с гуараной и без нее на настроение, когнитивные функции и функциональные активация мозга. Питательные вещества. 13 сентября 2013 г .; 5 (9): 3589-604. Посмотреть реферат.

Sette CVM, Ribas de Alcântara BB, Schoueri JHM и др. Очищенный сухой экстракт Paullinia cupana (PC-18) при усталости, вызванной химиотерапией: результаты двух двойных слепых рандомизированных клинических испытаний.J Diet Suppl 2018;15(5):673-83. дои: 10.1080/193

.2017.1384781. Посмотреть реферат.

Шет, М.С., Макфаул, М., Фишер, К.В., Столлингс, Н.Р., и Эстабрук, Р.В. Метаболизм антиандрогенного препарата (флутамид) CYP1A2 человека. Препарат Метаб Распоряжение. 1997;25(11):1298-1303. Посмотреть реферат.

Silva CP, Sampaio GR, Freitas RAMS, Torres EAFS. Полифенолы из гуараны после переваривания in vitro: оценка биодоступности и ингибирование активности ферментов, гидролизующих углеводы. Пищевая химия 2018;267:405-9. doi: 10.1016/j.foodchem.2017.08.078. Посмотреть реферат.

Сильвестрини Г.И., Марино Ф., Косентино М. Влияние коммерческого продукта, содержащего гуарану, на психологическое благополучие, тревогу и настроение: простое слепое плацебо-контролируемое исследование на здоровых субъектах. J отрицательные результаты биомед. 2013 25 мая; 12:9. Посмотреть реферат.

Синклер С.Дж., Гейгер Д.Д. Использование кофеина в спорте. Фармакологический обзор. J Sports Med Phys Fitness 2000;40:71-9. Посмотреть реферат.

Смит А.Влияние кофеина на поведение человека. Food Chem Toxicol 2002;40:1243-55. Посмотреть реферат.

Spinella M. Травяные лекарственные средства и эпилепсия: потенциальная польза и побочные эффекты. Эпилепсия Behav 2001;2(6):524-532. Посмотреть реферат.

Staib, A.H., Stille, W., Dietlein, G., Shah, P.M., Harder, S., Mieke, S. и Beer, C. Взаимодействие между хинолонами и кофеином. Наркотики 1987;34 Приложение 1:170-174. Посмотреть реферат.

Станек Э.Дж., Мелко Г.П., Чарланд С.Л. Ксантиновое вмешательство в визуализацию миокарда дипиридамолом-таллием-201.Pharmacother 1995;29:425-7. Посмотреть реферат.

Стилле В., Хардер С., Мике С., Бир К., Шах П. М., Фреч К. и Стаиб А. Х. Снижение элиминации кофеина у человека при одновременном приеме 4-хинолонов. J. Антимикроб. Химия. 1987;20(5):729-734. Посмотреть реферат.

Стуки Джей Ди. Неправильная классификация мочегонных эффектов алкоголя и кофеина и общего потребления воды. Eur J Epidemiol 1999;15:181-8. Посмотреть реферат.

Сулеман А., Сиддики Н.Х. Гемодинамические и сердечно-сосудистые эффекты кофеина.Medicine On Line Int J Medicine 2000. www.priory.com/pharmol/caffeine.htm (по состоянию на 14 апреля 2000 г.).

Национальная программа токсикологии (NTP). Кофеин. Центр оценки рисков для репродукции человека (CERHR). Доступно по адресу: https://cerhr.niehs.nih.gov/common/caffeine.html.

Тобиас Джей Ди. Кофеин в лечении апноэ, связанного с респираторно-синцитиальной вирусной инфекцией, у новорожденных и детей грудного возраста. Южный Мед J 2000; 93: 297-304. Посмотреть реферат.

Андервуд Д.А.Какие лекарства следует принять перед фармакологическим тестом или пробой с физической нагрузкой? Cleve Clin J Med 2002;69:449-50. Посмотреть реферат.

Ursing, C., Wikner, J., Brismar, K., and Rojdmark, S. Кофеин повышает уровень мелатонина в сыворотке у здоровых людей: показатель метаболизма мелатонина цитохромом P450 (CYP) 1A2. J.Endocrinol.Invest 2003;26(5):403-406. Посмотреть реферат.

Вахеди К., Доминго В., Амаренко П., Буссер М.Г. Ишемический инсульт у спортсмена, принимавшего экстракт MaHuang и моногидрат креатина для занятий бодибилдингом.J Neurol Neurosurg Psychiatr 2000;68:112-3. Посмотреть реферат.

ван дер Хувен Н., Виссер И., Шене А., ван ден Борн Б.Дж. Тяжелая артериальная гипертензия, связанная с кофеином и транилципромином: клинический случай. Энн Интерн Мед. 2014 6 мая; 160 (9): 657-8. дои: 10.7326/L14-5009-8. Аннотация недоступна. Посмотреть реферат.

Vandeberghe K, Gillis N, Van Leemputte M, et al. Кофеин противодействует эргогенному действию мышечной нагрузки креатином. J Appl Physiol 1996; 80:452-7. Посмотреть реферат.

Ваз Дж., Кулкарни К., Дэвид Дж. и Джозеф Т. Влияние кофеина на фармакокинетический профиль вальпроата натрия и карбамазепина у здоровых добровольцев. Индийская J.Exp.Biol. 1998;36(1):112-114. Посмотреть реферат.

Визи Р.К., Хаскелл-Рамзи С.Ф., Кеннеди Д.О., Уишарт К., Маггини С., Фукс С.Дж., Стивенсон Э.Дж. Влияние добавок с комплексом витаминов и минералов с гуараной перед упражнениями натощак на аффект, напряжение, когнитивные функции и метаболизм субстрата: рандомизированное контролируемое исследование.Питательные вещества. 2015 27 июля; 7 (8): 6109-27. Посмотреть реферат.

Валландер А., Паумгартнер Г. Влияние кетоконазола и тербинафина на фармакокинетику кофеина у здоровых добровольцев. Eur J Clin Pharmacol 1989;37:279-83. Посмотреть реферат.

Вакабаяши К., Коно С., Шинчи К. и др. Привычное потребление кофе и кровяное давление: исследование должностных лиц самообороны в Японии. Eur J Epidemiol 1998;14:669-73. Посмотреть реферат.

Wang, X. и Yeung, J. H. Влияние водного экстракта Salvia miltiorrhiza Bunge на фармакокинетику кофеина и активность микросомального CYP1A2 в печени у людей и крыс.J Pharm Pharmacol 2010;62(8):1077-1083. Посмотреть реферат.

Уотсон Дж. М., Дженкинс Э. Дж., Гамильтон П. и др. Влияние кофеина на частоту и восприятие гипогликемии у свободноживущих пациентов с диабетом 1 типа. Лечение диабета 2000; 23:455-9. Посмотреть реферат.

Уотсон Дж.М., Шервин Р.С., Дири И.Дж. и др. Диссоциация усиленных физиологических, гормональных и когнитивных реакций на гипогликемию при длительном употреблении кофеина. Clin Sci (Лондон) 2003;104:447-54. Посмотреть реферат.

Wemple RD, Lamb DR, McKeever KH.Кофеин и спортивные напитки без кофеина: влияние на выработку мочи в состоянии покоя и при длительных физических нагрузках. Int J Sports Med 1997; 18:40-6. Посмотреть реферат.

Вен Х, Одоули Р, Ли ДК. Потребление кофеина матерью во время беременности и риск выкидыша: проспективное когортное исследование. Am J Obstet Gynecol 2008;198:279.e1-8. Посмотреть реферат.

Wikoff D, Welsh BT, Henderson R, et al. Систематический обзор потенциальных побочных эффектов потребления кофеина у здоровых взрослых, беременных женщин, подростков и детей.Food Chem Toxicol 2017;109:585-648. Посмотреть реферат.

Williams MH, филиал JD. Креатиновые добавки и эффективность упражнений: обновление. J Am Coll Nutr 1998; 17: 216–34. Посмотреть реферат.

Winkelmayer WC, Stampfer MJ, Willett WC, Curhan GC. Привычное потребление кофеина и риск гипертонии у женщин. ДЖАМА 2005; 294:2330-5. Посмотреть реферат.

Wojcikowski, J. and Daniel, W. A. ​​Перазин в терапевтических концентрациях препарата ингибирует человеческий изофермент цитохрома P450 1A2 (CYP1A2) и метаболизм кофеина — исследование in vitro.Pharmacol Rep. 2009;61(5):851-858. Посмотреть реферат.

Чжэн XM, Williams RC. Уровни кофеина в сыворотке после 24-часового воздержания: клинические последствия дипиридамола (201)Tl для визуализации перфузии миокарда. J Nucl Med Technol 2002;30:123-7. Посмотреть реферат.

Чжэн Дж., Чен Б., Цзян Б., Цзэн Л., Тан З. Р., Фан Л. и Чжоу Х. Х. Влияние пуэрарина на активность CYP2D6 и CYP1A2 in vivo. Arch Pharm Res 2010;33(2):243-246. Посмотреть реферат.

Гуарана обеспечивает дополнительную стимуляцию по сравнению с одним только кофеином в модели Planaria

Abstract

Стимулирующий эффект энергетических напитков в первую очередь объясняется содержащимся в них кофеином.Многие энергетические напитки также содержат другие ингредиенты, которые могут усилить тонизирующий эффект этих напитков с кофеином. Одной из таких добавок является гуарана. Гуарана — это вьющееся растение, произрастающее в бассейне Амазонки, в семенах которого содержится примерно в четыре раза больше кофеина, чем в кофейных зернах. Считается, что смесь других природных химических веществ, содержащихся в семенах гуараны, усиливает стимулирующее действие гуараны по сравнению с одним лишь кофеином. Тем не менее, несмотря на растущее использование гуараны в качестве добавки к энергетическим напиткам и растущий рынок ее в качестве пищевой добавки, наука, изучающая гуарану и то, как она влияет на другие пищевые ингредиенты, отсутствует.Чтобы оценить стимулирующие эффекты гуараны и других натуральных продуктов, необходима простая модель для исследования их физиологических свойств. Планария обеспечивает такую ​​систему. Было показано, что локомоторная активность и судорожная реакция планарий на воздействие вещества представляют собой превосходную систему для измерения эффектов стимуляции лекарствами, зависимости и отмены. Чтобы оценить стимулирующее действие гуараны, мы изучили, как она влияет на двигательную активность планарий вида Dugesia tigrina .Мы сообщаем о доказательствах того, что семена гуараны обеспечивают дополнительную стимуляцию по сравнению с одним только кофеином, и документируем изменения этой стимуляции в контексте как кофеина, так и глюкозы.

Введение

Кофеин считается основным стимулирующим компонентом энергетических напитков, в то время как сахара и другие вещества, такие как гуарана, таурин и женьшень, добавляются, часто в сочетании с витаминами, для приготовления различных смесей [1, 2]. Энергетические напитки стали признанным средством для повышения когнитивных способностей, памяти, бдительности, физической работоспособности и сердечно-сосудистой деятельности [3–10].Но хотя потребление энергетических напитков продолжает расти, высказываются опасения по поводу высокого содержания в них кофеина, а вместе с этим и рисков, связанных с их потреблением, особенно молодыми людьми [1, 8, 11–15]. Использование гуараны и других материалов на растительной основе может еще больше увеличить содержание кофеина и общие стимулирующие свойства этих напитков, но, поскольку они считаются растительными добавками, на эти добавки на растительной основе не распространяются те же требования к отчетности, что и на сахар и кофеин.Следовательно, концентрация этих добавок, не говоря уже о том, что они могут содержать, обычно не указывается в рецептурах энергетических напитков. Это непонимание ставит под вопрос, как комбинация полученных ингредиентов может работать вместе, чтобы повлиять на здоровье тех, кто потребляет содержащие их продукты [2, 12–14, 16–18].

Гуарана ( Paullinia cupana ) — вид вьющегося растения, произрастающего в Амазонии, который известен как антиоксидант, традиционное лекарственное средство и эффективный стимулятор [19–25].В недавней работе также изучалось использование гуараны для борьбы с усталостью и депрессией, связанными с лечением рака [26–28]. Основным компонентом гуараны, которому приписывают эти полезные свойства, является кофеин, который, в зависимости от способа приготовления экстракта, может более чем в четыре раза превышать количество, содержащееся в кофейных зернах [19, 29]. Кроме того, считается, что другие компоненты семян гуараны обладают дополнительным стимулирующим эффектом по сравнению с одним только кофеином [19–23, 30]. Таким образом, растительные продукты, такие как гуарана, являются привлекательной добавкой для производителей многих популярных составов энергетических напитков, несмотря на отсутствие исследований, посвященных ассоциативным свойствам растительных экстрактов с другими пищевыми добавками, лекарствами и стимуляторами [29].

Чтобы оценить роль гуараны как стимулятора по сравнению с одним только кофеином, мы разработали простую, легко управляемую систему, используя планарию Dugesia tigrina , свободноживущего водного плоского червя, в качестве модельного организма. Планарий чаще всего используют в исследованиях, направленных на регенерацию и восстановление тканей, благодаря их исключительной регенеративной способности [31]. Планарии также хорошо подходят для изучения стимуляторов, потому что они обладают базовой билатеральной симметрией и соответствующей центральной нервной системой, которая использует системы нейротрансмиттеров, сравнимые с обнаруженными у млекопитающих [32-39].Планарии предпочитают темноту и используют фоторецепторы, чтобы обнаруживать свет и реагировать на него. Таким образом, планарии способны обучаться в лабиринтах и ​​могут вырабатывать условный ответ на свет, который может быть реализован в поведенческих исследованиях, в том числе при модификации лекарств [40, 41]. Анализы подвижности планарии также были разработаны для исследований зависимости от психоактивных веществ и отмены [42–53]. Поскольку анализ подвижности планарии предлагает простую, легко контролируемую систему для мониторинга воздействия раздражителей, мы приняли этот анализ для использования в нашем исследовании гуараны.Предыдущие исследования также показали, что кофеин не вызывает значительного увеличения активности планарии [47, 50]. Это наблюдение послужило дополнительным стимулом для использования планарии в нашей работе, поскольку оно дает благоприятный фон для изучения тонизирующих эффектов гуараны отдельно от эффектов кофеина.

Наблюдая за изменениями в подвижности планарии при воздействии гуараны, кофеина и глюкозы, мы определили, что семена гуараны содержат дополнительный стимулятор по сравнению с одним только кофеином, и что глюкоза может поддерживать эти тонизирующие эффекты.Мы также предоставляем доказательства того, что гуарана дает краткосрочную дополнительную пользу в сочетании с кофеином. Наши данные также свидетельствуют о том, что комбинация гуараны, кофеина и глюкозы обеспечивает кратковременный стимул при низких концентрациях.

Материалы и методы

Разведение планарий

Планарий ( Dugesia tigrina ) были приобретены у компании Carolina Biological Supply Company (132954; Берлингтон, Северная Каролина). Этот вид также упоминается как Girardia tigrina [54].Запасы содержали в темноте с использованием родниковой воды (Poland Spring), в которую часто добавляли 0,5 мМ NaHCO 3 . Для хранения образцов использовались пластиковые контейнеры для хранения пищевых продуктов с приоткрытыми крышками. Планариям давали возможность акклиматизироваться за одну неделю до кормления или экспериментов. В качестве пищи использовались органические яйца, сваренные вкрутую. Дважды в неделю небольшое количество яичного белка и желтка измельчали ​​и помещали в контейнеры. Планарии кормили ad libidum в течение одного-двух часов.Затем планарий переносили в свежие контейнеры и родниковую воду (Poland Spring). Культуральную воду меняли на следующий день, чтобы удалить мусор и сохранить воду свежей.

Тест скорости движения планарии (pLmV)

Тест скорости движения планарии (pLmV), установленный R.B. Raffa и S.M. Rawls был адаптирован для этого исследования [42, 43]. Вкратце, планарий приучали к соответствующему тестируемому веществу или комбинации в соответствующей концентрации либо в течение двух минут, либо в течение одного часа.Затем червей переносили в центр чашки Петри диаметром 10 см, помещенной на бумагу с сеткой, с линиями на расстоянии 0,5 см друг от друга, содержащей 20 мл того же испытуемого раствора. Подвижность планарии контролировали в течение 3 минут, оценивая количество пересеченных линий сетки. Испытываемые концентрации считались слишком высокими, если черви демонстрировали скручивание или судорожное поведение в течение периода привыкания. Каждое экспериментальное состояние тестировали не менее трех раз, и каждое испытание обычно проводили трижды, если не больше, так что окончательные данные pLmV оценивали с использованием по меньшей мере девяти червей для каждого условия.Для каждого теста исходные растворы экстракта гуараны, кофеина или глюкозы разводили в родниковой воде. Были предприняты меры для проведения тестов в разное время дня, чтобы учесть различные уровни зарождающейся или циркадной активности. Каждый набор тестов проводили два или три разных опытных экспериментатора. Не обнаружено заметного изменения качества воды, такого как pH, в результате применения исследуемых веществ в исследованных концентрациях. Каждый червь, включая контрольные экземпляры, использовался только один раз.

Стандартные растворы

Все растворы были приготовлены с использованием дистиллированной воды.Кофеин был приобретен у Sigma Aldrich (C7731; Сент-Луис, Миссури) и был приготовлен в виде исходного раствора с концентрацией 10 мМ или 1 мМ. D-глюкозу или декстрозу также получали от Sigma Aldrich (D9434; Сент-Луис, Миссури) в виде исходного раствора с концентрацией 561 мМ. Гуарана, использованная для этого исследования, была приобретена в Интернете в магазине Grass Hut Treasures (порошок цельных семян гуараны; www.grasshuttreasures.com/guarana/guaranapowder.html). Запасы гуараны были приготовлены на основе заявленного пятипроцентного содержания кофеина [19, 30]. Для приготовления 10 мМ и 1 мМ экстракта гуараны соответствующую массу порошка семян гуараны помещали в раствор, перемешивали в течение нескольких часов, а затем дважды фильтровали для удаления нерастворимого материала.Полученные экстракты гуараны охлаждали и хранили в бутылках, обернутых фольгой, чтобы защитить их от света.

Статистика

Все данные были нормализованы к соответствующим контролям и выражены как среднее +/- стандартное отклонение. Каждая точка данных была проанализирована с использованием двустороннего парного Т-критерия Стьюдента и считалась значимой, если соответствующее значение р было меньше 0,05.

Результаты

Гуарана обеспечивает дополнительную кратковременную стимуляцию по сравнению с одним только кофеином

Фактическая концентрация гуараны, присутствующей в энергетических напитках, обычно не сообщается, но кофеин считается основным стимулятором, присутствующим в семенах [19].Поэтому для приготовления растворов гуараны мы руководствовались опубликованными анализами содержания кофеина в семенах гуараны. Оцененное содержание кофеина в бобах гуараны варьировалось в зависимости от приготовления и метода анализа — от одного до двенадцати процентов — но обычно сообщалось, что оно составляет около пяти процентов [19, 24, 30]. Затем мы исследовали содержание кофеина в энергетических напитках, просматривая информацию, представленную на упаковках, и используя фиг. доступны на интернет-ресурсах. Эта информация использовалась для установления границ концентрации для наших тестов со стимуляторами [55, 56].Эти источники указывают на типичные концентрации кофеина в диапазоне от примерно 0,4 мМ до чуть более 2 мМ, поэтому мы выбрали диапазон концентраций, который соответствовал бы им и позволял нам свободно изучать комбинации как очищенного кофеина, так и гуараны, сохраняя при этом реалистичные концентрации кофеина. Выбранный диапазон охватывал от 0,001 до 10 мМ.

Тест скорости передвижения планарии (pLmV) был адаптирован для оценки стимулирующих свойств гуараны [42, 43]. Мы начали с тестирования набора концентраций, включая 0.001, 0,003, 0,01, 0,03, 0,1, 0,3, 1,0, 3,0 и 10 мМ и наблюдение за подвижностью планарии после двухминутного периода инкубации в экстракте семян гуараны (). Из протестированных концентраций наиболее эффективная стимуляция происходила выше 0,003 мМ, при этом значительная стимуляция происходила при 0,01 мМ (р = 0,02), 0,1 мМ (р = 0,008) и 1,0 мМ (р = 0,006). Экстракт семян гуараны в концентрации 10 мМ подавлял подвижность планарии (10) и вызывал многократное скручивание червей во время теста. Чтобы определить, обеспечит ли более длительное воздействие гуараны дополнительную стимуляцию или позволит более низким концентрациям воздействовать, мы наблюдали подвижность планарии через один час в 0.001, 0,003, 0,01, 0,03 и 0,1 мМ экстракта семян гуараны (). Как и при двухминутном воздействии, через час не наблюдалось значительной стимуляции подвижности планарий при 0,001 и 0,003 мМ. Мы по-прежнему наблюдали значительное увеличение активности при 0,01 мМ (p = 0,009), но эффект был потерян при 0,1 мМ.

Скорость движения планарии (pLmV) увеличивается в ответ на прием только гуараны.

Показаны выбранные данные pLmV относительно контролей, получавших только воду, для Dugesia tigrina , подвергшихся воздействию различных концентраций экстракта гуараны.Планарий приучали к соответствующим условиям либо в течение 2 минут (а), либо в течение 1 часа (б) до того, как отслеживали их активность pLmV. Подвижность планарии контролировали после того, как червей помещали в чашку Петри, содержащую соответствующую концентрацию экстракта семян гуараны, после тестируемого периода привыкания. Чашки Петри помещали на миллиметровую бумагу и в течение трех минут следили за количеством пересеченных линий сетки. Белая полоса представляет собой нормализованное контрольное значение pLmV, а черные столбцы указывают относительные значения pLmV для контрольного теста.Столбики погрешностей указывают на стандартное отклонение, а * указывает на p-значение менее 0,05 по сравнению с контролем только с водой.

В связи с тем, что наши результаты показали, что гуарана обеспечивает значительно большую стимуляцию подвижности планарий, мы продолжили тестировать влияние очищенного кофеина на pLmV. Поскольку другие исследователи определили, что кофеин не обеспечивает значительной стимуляции подвижности планарии, мы стремились использовать систему, чтобы оценить, обеспечивает ли гуарана дополнительный стимул по сравнению с одним кофеином [47, 50].Однако было необходимо определить, обеспечивают ли наша система и выбор видов планарий сопоставимый фон с этими опубликованными отчетами. Опять же, мы начали с тестирования подвижности планарии, используя диапазон концентраций кофеина (0,001, 0,003, 0,01, 0,03, 0,1, 0,3, 1,0, 3,0 и 10 мМ) после двухминутного периода воздействия (). Хотя подвижность планарии была немного повышена при концентрациях от 0,003 мМ до 3,0 мМ, мы не наблюдали какого-либо значительного увеличения общей активности планарии по сравнению с контрольной группой, получавшей только воду.Однако, поскольку рассчитанное p-значение для pLmV с использованием 0,001 мМ кофеина составило 0,05, что предполагает пограничную значимость, мы проверили, будут ли даже более низкие концентрации кофеина вызывать значительный пик активности. С этой целью мы исследовали эффект как 0,0001, так и 0,0003 мМ кофеина, но по-прежнему не наблюдали какого-либо значительного увеличения стимуляции по сравнению с контролем без кофеина (не показано). Как и в случае с экстрактом гуараны, 10 мМ кофеина подавляли подвижность планарии (1) и приводили к устойчивым сокращениям в течение периода анализа.Эти результаты сравнивали с временем инкубации в один час (1). Как и в случае с экстрактом гуараны, мы исследовали 0,001, 0,003, 0,01, 0,03 и 0,1 мМ, но опять же, кофеин сам по себе не вызывал существенного повышения pLmV. Эти результаты подтвердили, что очищенный кофеин обеспечивает заметную, хотя и незначительную стимуляцию движения планарии в испытанных концентрациях.

Кофеин сам по себе не способствует значительному увеличению скорости движения планарии (pLmV).

Показаны выбранные данные pLmV относительно контролей, получавших только воду, для Dugesia tigrina , подвергшихся воздействию различных концентраций кофеина.Планарий приучали к соответствующим условиям либо в течение 2 минут (а), либо в течение 1 часа (б) до того, как отслеживали их активность pLmV. Подвижность планарии контролировали после того, как червей помещали в чашку Петри, содержащую соответствующую концентрацию кофеина, после тестируемого периода привыкания. Чашки Петри помещали на миллиметровую бумагу и в течение трех минут следили за количеством пересеченных линий сетки. Белая полоса представляет собой нормализованное контрольное значение pLmV, а черные столбцы указывают относительные значения pLmV для контрольного теста.Столбики погрешностей указывают на стандартное отклонение, а * указывает на p-значение менее 0,05 по сравнению с контролем только с водой.

Чтобы определить, можно ли добиться дополнительного стимулирующего эффекта за счет сочетания кофеина и гуараны, мы использовали растворы, содержащие как низкие, так и высокие концентрации кофеина и экстракта семян гуараны, и оценивали активность планарии после экспозиции в течение двух минут или одного часа ( ). Поскольку экстракт семян гуараны в концентрации 0,1 мМ обеспечивает самый высокий средний относительный pLmV в тестируемом диапазоне концентраций, мы выбрали эту концентрацию для нашей высококачественной комбинации с кофеином.Концентрация кофеина 0,1 мМ также обеспечивала наибольшую среднюю относительную стимуляцию (рассчитанную как 1,21) на верхнем пределе по сравнению с контролем только с водой, несмотря на то, что она была меньше, чем пиковая концентрация 0,001 мМ, выбранная для комбинаций нижнего предела, которая имела средний относительный pLmV 1,26 (+). Комбинация 0,001 мМ кофеина и экстракта семян гуараны не привела к значительному повышению показателей pLmV ни через две минуты, ни через час. Однако, используя более высокую концентрацию 0,1 мМ для обоих растворов, мы наблюдали увеличение скорости движения через две минуты, но не через один час ().Среднее относительное значение pLmV при использовании комбинированного раствора после двухминутного воздействия было несколько выше, чем при использовании только экстракта гуараны, 1,55 () против 1,44 () соответственно. Эти два набора данных значительно отличались друг от друга с p-значением 0,006. Наши результаты показали, что гуарана обеспечивает дополнительный уровень стимуляции по сравнению с кофеином.

Гуарана поддерживает дополнительную кратковременную стимуляцию скорости движения планарии (pLmV) по сравнению с одним только кофеином.

Показаны данные pLmV относительно контролей, получавших только воду, для Dugesia tigrina , подвергшихся воздействию комбинации 0,001 мМ экстракта семян гуараны и 0,001 мМ кофеина (серые столбцы) или 0,1 мМ экстракта гуараны и 0,001 мМ кофеина (черные столбцы). Планарий приучали к соответствующим условиям либо в течение 2 минут, либо в течение 1 часа, как указано, до того, как отслеживали их активность pLmV. Подвижность планарии контролировали после того, как червей помещали в чашку Петри, содержащую соответствующие концентрации экстракта семян гуараны и кофеина, после тестируемого периода привыкания.Чашки Петри помещали на миллиметровую бумагу и в течение трех минут следили за количеством пересеченных линий сетки. Белая полоса представляет собой нормализованное контрольное значение pLmV, а черные столбцы указывают относительные значения pLmV для контрольного теста. Столбики погрешностей указывают на стандартное отклонение, а * указывает на p-значение менее 0,05 по сравнению с контролем только с водой.

Низкие концентрации глюкозы поддерживают долгосрочную стимуляцию гуараной

Поскольку сахар также является основным ингредиентом большинства энергетических напитков, мы далее оценили, как глюкоза влияет на стимуляцию гуараной и кофеином.Для начала мы определили, сколько сахара содержится в этих напитках, изучив список ингредиентов на упаковках. Часто содержание сахара не сообщалось полностью или просто указывалось как «сахар», без предоставления подробной информации о том, какой именно сахар учитывался. Кроме того, если был указан тип сахара, часто сообщалось о разных количествах для каждого из них — сахарозы, фруктозы и глюкозы. Также было обнаружено, что «специальные смеси» содержат дополнительный сахар без раскрытия концентрации. Мы также оценивали диапазоны концентраций с помощью онлайн-ресурсов [55, 57].Мы решили использовать глюкозу в качестве стандарта сахара, потому что это наиболее легко метаболизируемый сахар, и определили, что концентрация сахара колеблется от 290 до 730 мМ. Затем мы рассчитали среднюю концентрацию сахара, указанную на упаковках с напитками, как 561 мМ, которую мы приняли за глюкозу. Мы использовали этот рисунок для приготовления нашего стандартного маточного раствора. Как и в случае с гуараной и кофеином, мы провели исследование pLmV, используя только глюкозу после экспозиции в течение двух минут и одного часа (2). Концентрация 561 мМ оказалась ингибирующей передвижение планарии, что определялось повторяющимся поведением скручивания, и поэтому мы провели наши эксперименты с серией концентраций глюкозы ниже этого значения (0.561, 1,683, 5,61, 16,83, 56,1, 168,3 и 561 мМ). Мы не обнаружили какого-либо значительного увеличения pLmV при использовании любой из этих концентраций после двухминутного или одночасового периода воздействия. Однако мы обнаружили пик средней относительной стимуляции 1,22 при 5,61 мМ после двухминутного привыкания. Это значительно отличалось от среднего относительного pLmV 0,92 при 0,561 мМ с p-значением p = 6,0×10 -6 (). Напротив, средние относительные двигательные скорости для концентраций глюкозы, протестированные после одночасового воздействия глюкозы (), не привели к каким-либо заметным пикам стимуляции выше контроля с водой, несмотря на значительную разницу между 0.561 и 5,61 мМ (средний относительный pLmV 1,15 и 1,17 соответственно; p = 0,011).

Глюкоза сама по себе не способствует значительному увеличению двигательной скорости планарии (pLmV).

Показаны выбранные данные pLmV относительно контролей, получавших только воду, для Dugesia tigrina , подвергшихся воздействию различных концентраций глюкозы. Планарий приучали к соответствующим условиям либо в течение 2 минут (а), либо в течение 1 часа (б) до того, как отслеживали их активность pLmV. Подвижность планарии контролировали после помещения червей в чашку Петри, содержащую соответствующую концентрацию глюкозы, после тестируемого периода привыкания.Чашки Петри помещали на миллиметровую бумагу и в течение трех минут следили за количеством пересеченных линий сетки. Белая полоса представляет собой нормализованное контрольное значение pLmV, а черные столбцы указывают относительные значения pLmV для контрольного теста. Столбики погрешностей указывают на стандартное отклонение, а * указывает на p-значение менее 0,05 по сравнению с контролем только с водой.

Затем мы оценили, как комбинация гуараны с глюкозой влияет на pLmV, используя низкие и высокие концентрации после двухминутного и одночасового воздействия ().На нижнем уровне, при концентрации 0,001 мМ экстракта гуараны, дополненного 0,561 мМ глюкозы, мы наблюдали значительное увеличение подвижности через один час (p = 1,5×10 -4 ). Важно отметить, что ни экстракт гуараны, ни глюкоза сами по себе не оказывали значительной стимуляции в этот момент времени при 0,001 мМ или 0,561 мМ соответственно. Это говорит о том, что при низких концентрациях глюкоза оказывает поддерживающее действие на стимуляцию гуараной в течение более длительного периода времени. Напротив, этот эффект не был очевиден при использовании комбинированной высококонцентрированной концентрации, состоящей из 0.1 мМ гуараны и 5,61 мМ глюкозы, что на самом деле слегка подавляло подвижность планарии в среднем после одночасового периода воздействия. Вместо этого высокие данные о концентрации привели к значительной стимуляции через две минуты (p = 0,032). Примечательно, что гуарана действительно обеспечивала стимуляцию в качестве отдельного реагента через две минуты при концентрации 0,1 мМ со средним относительным pLmV 1,44 по сравнению с контролем с водой (), а с глюкозой это значение фактически снизилось до pLmV 1,24 по сравнению с контролем ( ).Статистический анализ показал, что двухминутные однократные данные гуараны при 0,1 мМ и комбинированные данные высокой концентрации с использованием экстракта гуараны и глюкозы значительно отличались друг от друга (p = 1,0×10 -7 ).

Глюкоза поддерживает стимуляцию гуараной двигательной скорости планарии (pLmV).

Показаны данные pLmV относительно контролей, получавших только воду, для Dugesia tigrina , подвергшихся воздействию комбинации 0,001 мМ экстракта семян гуараны и 0,561 мМ глюкозы (серые столбцы), или 0.Экстракт семян гуараны 1 мМ и глюкоза 5,61 мМ (черные столбцы). Планарий приучали к соответствующим условиям либо в течение 2 минут, либо в течение 1 часа, как указано, до того, как отслеживали их активность pLmV. Подвижность планарии контролировали после того, как червей помещали в чашку Петри, содержащую соответствующие концентрации экстракта гуараны и глюкозы, после тестируемого периода привыкания. Чашки Петри помещали на миллиметровую бумагу и в течение трех минут следили за количеством пересеченных линий сетки.Белая полоса представляет собой нормализованное контрольное значение pLmV, а черные столбцы указывают относительные значения pLmV для контрольного теста. Столбики погрешностей указывают на стандартное отклонение, а * указывает на p-значение менее 0,05 по сравнению с контролем только с водой.

Напротив, после дополнительной оценки кофеина и глюкозы () мы не наблюдали увеличения скорости движения планарии ни при низких, ни при высоких концентрациях в течение инкубационного периода продолжительностью две минуты и один час.Эти результаты еще раз подчеркнули потенциальную разницу между гуараной и кофеином в том, что реакция на глюкозу была разной между двумя стимуляторами.

Глюкоза не усиливает действие кофеина на скорость движения планарии (pLmV).

Показаны данные pLmV относительно контролей, получавших только воду, для Dugesia tigrina , подвергшихся воздействию комбинации 0,001 мМ кофеина и 0,561 мМ глюкозы (серые столбцы) или 0,1 мМ кофеина и 5,61 мМ глюкозы (черные столбцы). Планарий приучали к соответствующим условиям либо в течение 2 минут, либо в течение 1 часа, как указано, до того, как отслеживали их активность pLmV.Подвижность планарии контролировали после того, как червей помещали в чашку Петри, содержащую соответствующие концентрации кофеина и глюкозы, после тестируемого периода привыкания. Чашки Петри помещали на миллиметровую бумагу и в течение трех минут следили за количеством пересеченных линий сетки. Белая полоса представляет собой нормализованное контрольное значение pLmV, а черные столбцы указывают относительные значения pLmV для контрольного теста. Столбики погрешностей указывают на стандартное отклонение, а * указывает на p-значение меньше 0.05 по сравнению с контролем только на воде.

Гуарана в сочетании с глюкозой и кофеином обеспечивает краткосрочный стимул при низких концентрациях

При оценке скорости движения с использованием экстракта семян гуараны вместе с кофеином и глюкозой () каждая гуарана и кофеин с 0,561 мМ глюкозы) всего через две минуты привыкания (p = 0,041). Важно отметить, что мы не обнаружили стимуляции низкой концентрации через две минуты с двойными комбинациями экстракта семян гуараны и кофеина, экстракта семян гуараны и глюкозы или кофеина и глюкозы (рис. 1 и 2 соответственно).Это говорит о том, что некоторое стимулирующее действие может быть достигнуто за счет комбинации всех трех веществ, которое могло бы не проявляться иначе при более низких концентрациях любого из трех веществ по отдельности или в паре в течение короткого времени. Значимый стимул низкой концентрации сохранялся в течение одного часа, хотя и на более низком уровне, со средним относительным значением стимуляции 1,21 по сравнению с 1,36, которое наблюдалось через две минуты (p = 0,016). Но мы также наблюдали средний относительный стимул низкой концентрации с экстрактом гуараны при 0.0,001 мМ в сочетании с 0,561 мМ глюкозы при 1,31 (1,31) в час, что было больше, чем при добавлении кофеина в тройную комбинацию, что свидетельствует о том, что кофеин может не способствовать одночасовой тройной комбинированной стимуляции pLmV при низкие концентрации.

Гуарана с глюкозой и кофеином поддерживает двигательную скорость планарии (pLmV) при низких концентрациях.

Показаны данные pLmV относительно контролей, получавших только воду, для Dugesia tigrina , подвергшихся воздействию комбинации 0.0,001 мМ экстракта семян гуараны, 0,001 мМ кофеина и 0,561 мМ глюкозы (серые столбцы) или 0,1 мМ экстракта семян гуараны, 0,1 мМ кофеина и 5,61 мМ глюкозы (черные столбцы). Планарий приучали к соответствующим условиям либо в течение 2 минут, либо в течение 1 часа, как указано, до того, как отслеживали их активность pLmV. Подвижность планарии контролировали после того, как червей помещали в чашку Петри, содержащую соответствующие концентрации экстракта гуараны, кофеина и глюкозы, после тестируемого периода привыкания.Чашки Петри помещали на миллиметровую бумагу и в течение трех минут следили за количеством пересеченных линий сетки. Белая полоса представляет собой нормализованное контрольное значение pLmV, а черные столбцы указывают относительные значения pLmV для контрольного теста. Столбики погрешностей указывают на стандартное отклонение, а * указывает на p-значение менее 0,05 по сравнению с контролем только с водой.

Напротив, несмотря на наблюдаемое улучшение pLmV по сравнению с контролем, когда планарии подвергались воздействию комбинации экстракта семян гуараны и кофеина в более высоких концентрациях (0.1 мМ каждого; ) и комбинации экстракта гуараны и глюкозы (0,1 мМ экстракта семян гуараны и 5,61 мМ глюкозы; ) уже через две минуты мы не наблюдали значительной дополнительной стимуляции при использовании более высоких концентраций всех трех веществ (0,1 мМ для обоих семян гуараны). экстракт и кофеин, с 5,61 мМ глюкозы) после кратковременного двухминутного воздействия. Эти данные свидетельствуют о том, что краткосрочная польза достигается с гуараной, кофеином и глюкозой, но при комбинировании в более низких концентрациях.

Обсуждение

Энергетические напитки обычно содержат кофеин и сахар в качестве основных активных ингредиентов. Но многие популярные бренды также содержат смеси других веществ, которые якобы обеспечивают дополнительный стимул. Одной из таких все более распространенных добавок является гуарана. В этом исследовании мы задались вопросом, может ли гуарана оказывать дополнительный стимулирующий эффект по сравнению с одним только кофеином, используя анализ двигательной активности планарии (pLmV) [42, 43]. Сообщения, предполагающие, что кофеин не оказывает существенного влияния на активность планарии, поддержали наш выбор модельной системы, поскольку она позволила нам обнаружить тонизирующие эффекты компонентов семян гуараны отдельно от эффектов, обеспечиваемых кофеином [47, 50].В связи с тем, что кофеин обычно считается ответственным за стимулирующие свойства гуараны, мы использовали заявленное пятипроцентное содержание кофеина в семенах гуараны и типичный диапазон концентраций кофеина, указанный для большинства составов энергетических напитков, в качестве отправной точки для нашей работы. концентрации гуараны [19, 30, 55, 56].

При сравнении концентраций кофеина и гуараны на подвижность планарии действительно было очевидно, что кофеин не вызывал значительного увеличения pLmV ни при каких протестированных концентрациях, в то время как гуарана оказывала положительный эффект в диапазоне концентраций от 0.01 до 1,0 мМ (рис. и ). Примечательно, что средний относительный pLmV для каждой из концентраций кофеина выше 0,1 мМ после двухминутного привыкания, хотя и незначительно отличается от контроля с водой, имеет тенденцию к снижению и значительно выше 1,0 мМ, в том смысле, что p-значения между эти различные концентрации кофеина были менее 0,05 (+). Это контрастировало с результатами для одного только экстракта гуараны через две минуты, когда мы наблюдали пик стимуляции при использовании концентрации 0.1 мМ, но с сохранением значительного стимулирующего воздействия по сравнению с водными контролями даже при десятикратно более высокой концентрации (). Если бы мы выбрали менее консервативное содержание кофеина для нашего порошка семян гуараны, например, верхнюю оценку содержания кофеина в 10 процентов (удвоив нашу оценку), наша верхняя предельная концентрация 1,0 мМ была бы порядка 2,0 мМ кофеина и имела бы гораздо более высокий средний относительный pLmV по сравнению с одним кофеином. Таким образом, поскольку данные для кофеина и экстракта гуараны не соответствуют одному и тому же общему образцу активности, это также предполагает, что гуарана обеспечивает другое стимулирующее значение, отличное от кофеина.

Анализ данных pLmV, собранных после одночасового привыкания к одному кофеину, не выявил признаков стимуляции при любой тестируемой концентрации, что указывает на то, что даже тенденция к низкому уровню стимуляции, хотя и не значительно больше, чем контрольная вода, была короткой. -термин эффект (). В противоположность этому, данные, полученные через час после воздействия pLmV, подвергнутого воздействию экстракта семян гуараны, показали значительный стимул при 0,01 мМ, но не при 0,1 мМ (10). Эти результаты, полученные с помощью гуараны, показали, что более долгосрочный стимул может поддерживаться при более низких концентрациях, что является дополнительным доказательством в поддержку разницы между стимуляцией гуараной и кофеином.В целом, однако, мы предполагаем, что одночасовые данные как для кофеина, так и для гуараны указывают на то, что реакция типа толерантности возникает при длительном воздействии более высоких концентраций этих стимуляторов. Важно отметить, что другие исследователи заметили, что планарии лучше всего реагируют на стимуляторы в течение первых пяти минут воздействия, что также отражено в наших выводах [50].

Наши данные о двигательной активности, сочетающие выбранные низкие и высокие концентрации экстракта семян гуараны и кофеина (), показали, что гуарана обеспечивает дополнительную стимуляцию по сравнению с тем, что обеспечивается одним кофеином.Ни экстракт семян гуараны, ни кофеин сами по себе не обеспечивали заметного увеличения pLmV в качестве отдельного стимулятора при низкой исследованной концентрации (0,001 мМ, рис. и , соответственно), и это не изменилось при комбинировании веществ (). Но при комбинировании более высоких концентраций 0,1 мМ наблюдалось увеличение относительной средней подвижности после кратковременного двухминутного воздействия (2). Этот средний относительный pLmV был выше, чем тот, который наблюдался только для экстракта гуараны, что указывает на дополнительную кратковременную стимуляцию за счет комбинации более высоких концентраций гуараны и кофеина.Кроме того, поскольку такой аддитивный эффект не наблюдался при простом увеличении концентрации кофеина (), дополнительная стимуляция, обеспечиваемая экстрактом семян гуараны, может быть обеспечена каким-либо другим водорастворимым ингредиентом в семенах, который функционирует с использованием метаболического пути, отличного от используемого. кофеином. Примечательно, что другая группа, изучавшая влияние гуараны на мышей, также наблюдала увеличение активности, которое, вероятно, действовало с использованием механизма, отличного от механизма, используемого кофеином [20].Подтверждая нашу гипотезу о том, что гуарана обладает стимулирующими свойствами независимо от кофеина, этот подтверждающий результат также поддерживает использование планарии для исследований, связанных со стимулирующими эффектами в системах млекопитающих.

Предполагается, что стимулирующий эффект кофеина опосредуется рядом механизмов, включая внутриклеточную мобилизацию кальция, ингибирование фосфодиэстераз, связывание кофеина с бензодиазепиновыми рецепторами и антагонизм на уровне аденозиновых рецепторов [58, 59] .В то время как кофеин в гуаране, вероятно, работает по этим механизмам, другие компоненты, возможно, действуют по другим путям. Известно, что в дополнение к кофеину семена гуараны содержат ряд других возможных стимуляторов, таких как катахины, дубильные вещества и другие алкалоиды, такие как теофиллин и теобромин [19, 22, 30, 60]. В настоящее время имеется мало информации о преимуществах одного из этих ингредиентов перед другими.

Мы расширили нашу работу, чтобы рассмотреть влияние сахара на pLmV в сочетании с кофеином и нашим экстрактом семян гуараны.Конкретные сахара в разновидностях энергетических напитков различаются, поэтому в нашем исследовании мы решили работать с D-глюкозой или декстрозой. Не все производители энергетических напитков раскрывают полные концентрации сахаров в своих рецептурах, поэтому мы рассчитали среднюю концентрацию для использования в наших экспериментах. Мы получили это значение, усреднив количество сахара, указанное на нескольких контейнерах, которые давали некоторые сведения об общем количестве содержащихся в них сахаров. Мы сравнили это количество с оценками общего содержания сахара в энергетических напитках, обнаруженными в Интернете, которые были отражены в выбранной нами концентрации запасов [55, 57].Хотя мы наблюдали, что глюкоза сама по себе не вызывала очевидной стимуляции подвижности планарии (1), она действительно поддерживала стимуляцию гуараной при низких концентрациях в течение более длительного времени (12). Это особенно интересно тем, что ни одна глюкоза (1), ни экстракт семян гуараны (1) не приводили к увеличению pLmV после одночасового привыкания к этим концентрациям. Мы также наблюдали значительную кратковременную относительную среднюю стимуляцию при комбинировании высоких концентраций глюкозы и экстракта семян гуараны (), но поскольку только экстракт семян гуараны приводил к значительному увеличению pLmV () через тот же период времени, было невозможно определить, усилила ли глюкоза этот эффект, используя нашу систему.Но наши данные свидетельствуют о том, что при низких концентрациях глюкоза оказывает поддерживающее действие на стимуляцию гуараной в течение более длительных периодов времени. Эти данные согласуются с опубликованными сообщениями о том, что глюкоза может поддерживать эффект стимуляторов в модели планарии [48]. И наоборот, наши комбинации глюкозы и кофеина не приводили к увеличению подвижности планарии ни в один из исследованных моментов времени (2), что является дополнительным свидетельством стимулирующих свойств гуараны, которые действительно отличаются от свойств кофеина.

Совместное воздействие на планарий экстракта семян гуараны, кофеина и глюкозы привело к усилению подвижности планарий как после краткосрочной, так и при длительной стимуляции, но только при нашей комбинации с низкой концентрацией (). Однако, поскольку наша низкая концентрация экстракта семян гуараны в сочетании с низкой концентрацией глюкозы также обеспечивала устойчивую значительную стимуляцию после одночасовой инкубации, мы не можем сделать вывод, что кофеин оказывал дополнительный эффект в этой ситуации. С другой стороны, тройная комбинация была единственной протестированной, которая привела к увеличению pLmV уже после двух минут воздействия стимулятора.Примечательно, что эти данные свидетельствуют о том, что низкие концентрации гуараны, кофеина и глюкозы в сочетании достаточны для обеспечения краткосрочного стимула.

Мы повторяем, что, поскольку и кофеин, и глюкоза обеспечивают лишь низкий уровень стимуляции в модели планарии, мы смогли обнаружить возможность других стимулирующих веществ в экстракте семян гуараны и оценить, могут ли кофеин и глюкоза усиливать эти эффекты. Будущие исследования потребуются для определения фактического дополнительного стимулятора, содержащегося в гуаране [19].Но наше общее впечатление от этой работы состоит в том, что гуарана предлагает дополнительную стимуляцию по сравнению с кофеином, и что как кофеин, так и глюкоза могут изменить характер этой стимуляции. Очевидно, что для полной оценки того, как энергетические напитки влияют на физиологию, важно учитывать комбинацию содержащихся в них заместителей, поскольку эти вещества могут вести себя по-разному при смешивании вместе в одной и той же рецептуре. Действительно, другие также выдвинули идею изучения комбинаций компонентов энергетических напитков на человеческих моделях [9, 18, 25, 61], но, учитывая сложности контроля пищевых привычек человека, особенно когда речь идет о кофеине, мы предполагаем, что планарий system предлагает простой первый подход к изучению этих сложных взаимодействий.Также следует отметить, что наши наблюдения, сделанные при комбинировании экстракта семян гуараны, кофеина и глюкозы, показали краткосрочную пользу в низких концентрациях, противоречащую общему мнению, что «чем больше, тем лучше» в рецептурах энергетических напитков. Требуются дальнейшие исследования, но наши предварительные результаты с использованием модели планарии показывают, что более низкие дозы стимуляторов могут работать вместе, чтобы обеспечить краткосрочный стимулирующий эффект, и что сочетание большего количества этих ингредиентов может не дать долгосрочной пользы.

Гуарана обеспечивает дополнительную стимуляцию по сравнению с одним только кофеином в модели Planaria

Abstract

Стимулирующий эффект энергетических напитков в первую очередь объясняется содержащимся в них кофеином. Многие энергетические напитки также содержат другие ингредиенты, которые могут усилить тонизирующий эффект этих напитков с кофеином. Одной из таких добавок является гуарана. Гуарана — это вьющееся растение, произрастающее в бассейне Амазонки, в семенах которого содержится примерно в четыре раза больше кофеина, чем в кофейных зернах.Считается, что смесь других природных химических веществ, содержащихся в семенах гуараны, усиливает стимулирующее действие гуараны по сравнению с одним лишь кофеином. Тем не менее, несмотря на растущее использование гуараны в качестве добавки к энергетическим напиткам и растущий рынок ее в качестве пищевой добавки, наука, изучающая гуарану и то, как она влияет на другие пищевые ингредиенты, отсутствует. Чтобы оценить стимулирующие эффекты гуараны и других натуральных продуктов, необходима простая модель для исследования их физиологических свойств.Планария обеспечивает такую ​​систему. Было показано, что локомоторная активность и судорожная реакция планарий на воздействие вещества представляют собой превосходную систему для измерения эффектов стимуляции лекарствами, зависимости и отмены. Чтобы оценить стимулирующее действие гуараны, мы изучили, как она влияет на двигательную активность планарий вида Dugesia tigrina . Мы сообщаем о доказательствах того, что семена гуараны обеспечивают дополнительную стимуляцию по сравнению с одним только кофеином, и документируем изменения этой стимуляции в контексте как кофеина, так и глюкозы.

Введение

Кофеин считается основным стимулирующим компонентом энергетических напитков, в то время как сахара и другие вещества, такие как гуарана, таурин и женьшень, добавляются, часто в сочетании с витаминами, для приготовления различных смесей [1, 2]. Энергетические напитки стали признанным средством для повышения когнитивных способностей, памяти, бдительности, физической работоспособности и сердечно-сосудистой деятельности [3–10]. Но хотя потребление энергетических напитков продолжает расти, высказываются опасения по поводу высокого содержания в них кофеина, а вместе с этим и рисков, связанных с их потреблением, особенно молодыми людьми [1, 8, 11–15].Использование гуараны и других материалов на растительной основе может еще больше увеличить содержание кофеина и общие стимулирующие свойства этих напитков, но, поскольку они считаются растительными добавками, на эти добавки на растительной основе не распространяются те же требования к отчетности, что и на сахар и кофеин. Следовательно, концентрация этих добавок, не говоря уже о том, что они могут содержать, обычно не указывается в рецептурах энергетических напитков. Это непонимание ставит под вопрос, как комбинация полученных ингредиентов может работать вместе, чтобы повлиять на здоровье тех, кто потребляет содержащие их продукты [2, 12–14, 16–18].

Гуарана ( Paullinia cupana ) — вид вьющегося растения, произрастающего в Амазонии, который известен как антиоксидант, традиционное лекарственное средство и эффективный стимулятор [19–25]. В недавней работе также изучалось использование гуараны для борьбы с усталостью и депрессией, связанными с лечением рака [26–28]. Основным компонентом гуараны, которому приписывают эти полезные свойства, является кофеин, который, в зависимости от способа приготовления экстракта, может более чем в четыре раза превышать количество, содержащееся в кофейных зернах [19, 29].Кроме того, считается, что другие компоненты семян гуараны обладают дополнительным стимулирующим эффектом по сравнению с одним только кофеином [19–23, 30]. Таким образом, растительные продукты, такие как гуарана, являются привлекательной добавкой для производителей многих популярных составов энергетических напитков, несмотря на отсутствие исследований, посвященных ассоциативным свойствам растительных экстрактов с другими пищевыми добавками, лекарствами и стимуляторами [29].

Чтобы оценить роль гуараны как стимулятора по сравнению с одним только кофеином, мы разработали простую, легко управляемую систему, используя планарию Dugesia tigrina , свободноживущего водного плоского червя, в качестве модельного организма.Планарий чаще всего используют в исследованиях, направленных на регенерацию и восстановление тканей, благодаря их исключительной регенеративной способности [31]. Планарии также хорошо подходят для изучения стимуляторов, потому что они обладают базовой билатеральной симметрией и соответствующей центральной нервной системой, которая использует системы нейротрансмиттеров, сравнимые с обнаруженными у млекопитающих [32-39]. Планарии предпочитают темноту и используют фоторецепторы, чтобы обнаруживать свет и реагировать на него. Таким образом, планарии способны обучаться в лабиринтах и ​​могут вырабатывать условный ответ на свет, который может быть реализован в поведенческих исследованиях, в том числе при модификации лекарств [40, 41].Анализы подвижности планарии также были разработаны для исследований зависимости от психоактивных веществ и отмены [42–53]. Поскольку анализ подвижности планарии предлагает простую, легко контролируемую систему для мониторинга воздействия раздражителей, мы приняли этот анализ для использования в нашем исследовании гуараны. Предыдущие исследования также показали, что кофеин не вызывает значительного увеличения активности планарии [47, 50]. Это наблюдение послужило дополнительным стимулом для использования планарии в нашей работе, поскольку оно дает благоприятный фон для изучения тонизирующих эффектов гуараны отдельно от эффектов кофеина.

Наблюдая за изменениями в подвижности планарии при воздействии гуараны, кофеина и глюкозы, мы определили, что семена гуараны содержат дополнительный стимулятор по сравнению с одним только кофеином, и что глюкоза может поддерживать эти тонизирующие эффекты. Мы также предоставляем доказательства того, что гуарана дает краткосрочную дополнительную пользу в сочетании с кофеином. Наши данные также свидетельствуют о том, что комбинация гуараны, кофеина и глюкозы обеспечивает кратковременный стимул при низких концентрациях.

Материалы и методы

Разведение планарий

Планарий ( Dugesia tigrina ) были приобретены у компании Carolina Biological Supply Company (132954; Берлингтон, Северная Каролина).Этот вид также упоминается как Girardia tigrina [54]. Запасы содержали в темноте с использованием родниковой воды (Poland Spring), в которую часто добавляли 0,5 мМ NaHCO 3 . Для хранения образцов использовались пластиковые контейнеры для хранения пищевых продуктов с приоткрытыми крышками. Планариям давали возможность акклиматизироваться за одну неделю до кормления или экспериментов. В качестве пищи использовались органические яйца, сваренные вкрутую. Дважды в неделю небольшое количество яичного белка и желтка измельчали ​​и помещали в контейнеры.Планарии кормили ad libidum в течение одного-двух часов. Затем планарий переносили в свежие контейнеры и родниковую воду (Poland Spring). Культуральную воду меняли на следующий день, чтобы удалить мусор и сохранить воду свежей.

Тест скорости движения планарии (pLmV)

Тест скорости движения планарии (pLmV), установленный R.B. Raffa и S.M. Rawls был адаптирован для этого исследования [42, 43]. Вкратце, планарий приучали к соответствующему тестируемому веществу или комбинации в соответствующей концентрации либо в течение двух минут, либо в течение одного часа.Затем червей переносили в центр чашки Петри диаметром 10 см, помещенной на бумагу с сеткой, с линиями на расстоянии 0,5 см друг от друга, содержащей 20 мл того же испытуемого раствора. Подвижность планарии контролировали в течение 3 минут, оценивая количество пересеченных линий сетки. Испытываемые концентрации считались слишком высокими, если черви демонстрировали скручивание или судорожное поведение в течение периода привыкания. Каждое экспериментальное состояние тестировали не менее трех раз, и каждое испытание обычно проводили трижды, если не больше, так что окончательные данные pLmV оценивали с использованием по меньшей мере девяти червей для каждого условия.Для каждого теста исходные растворы экстракта гуараны, кофеина или глюкозы разводили в родниковой воде. Были предприняты меры для проведения тестов в разное время дня, чтобы учесть различные уровни зарождающейся или циркадной активности. Каждый набор тестов проводили два или три разных опытных экспериментатора. Не обнаружено заметного изменения качества воды, такого как pH, в результате применения исследуемых веществ в исследованных концентрациях. Каждый червь, включая контрольные экземпляры, использовался только один раз.

Стандартные растворы

Все растворы были приготовлены с использованием дистиллированной воды.Кофеин был приобретен у Sigma Aldrich (C7731; Сент-Луис, Миссури) и был приготовлен в виде исходного раствора с концентрацией 10 мМ или 1 мМ. D-глюкозу или декстрозу также получали от Sigma Aldrich (D9434; Сент-Луис, Миссури) в виде исходного раствора с концентрацией 561 мМ. Гуарана, использованная для этого исследования, была приобретена в Интернете в магазине Grass Hut Treasures (порошок цельных семян гуараны; www.grasshuttreasures.com/guarana/guaranapowder.html). Запасы гуараны были приготовлены на основе заявленного пятипроцентного содержания кофеина [19, 30]. Для приготовления 10 мМ и 1 мМ экстракта гуараны соответствующую массу порошка семян гуараны помещали в раствор, перемешивали в течение нескольких часов, а затем дважды фильтровали для удаления нерастворимого материала.Полученные экстракты гуараны охлаждали и хранили в бутылках, обернутых фольгой, чтобы защитить их от света.

Статистика

Все данные были нормализованы к соответствующим контролям и выражены как среднее +/- стандартное отклонение. Каждая точка данных была проанализирована с использованием двустороннего парного Т-критерия Стьюдента и считалась значимой, если соответствующее значение р было меньше 0,05.

Результаты

Гуарана обеспечивает дополнительную кратковременную стимуляцию по сравнению с одним только кофеином

Фактическая концентрация гуараны, присутствующей в энергетических напитках, обычно не сообщается, но кофеин считается основным стимулятором, присутствующим в семенах [19].Поэтому для приготовления растворов гуараны мы руководствовались опубликованными анализами содержания кофеина в семенах гуараны. Оцененное содержание кофеина в бобах гуараны варьировалось в зависимости от приготовления и метода анализа — от одного до двенадцати процентов — но обычно сообщалось, что оно составляет около пяти процентов [19, 24, 30]. Затем мы исследовали содержание кофеина в энергетических напитках, просматривая информацию, представленную на упаковках, и используя фиг. доступны на интернет-ресурсах. Эта информация использовалась для установления границ концентрации для наших тестов со стимуляторами [55, 56].Эти источники указывают на типичные концентрации кофеина в диапазоне от примерно 0,4 мМ до чуть более 2 мМ, поэтому мы выбрали диапазон концентраций, который соответствовал бы им и позволял нам свободно изучать комбинации как очищенного кофеина, так и гуараны, сохраняя при этом реалистичные концентрации кофеина. Выбранный диапазон охватывал от 0,001 до 10 мМ.

Тест скорости передвижения планарии (pLmV) был адаптирован для оценки стимулирующих свойств гуараны [42, 43]. Мы начали с тестирования набора концентраций, включая 0.001, 0,003, 0,01, 0,03, 0,1, 0,3, 1,0, 3,0 и 10 мМ и наблюдение за подвижностью планарии после двухминутного периода инкубации в экстракте семян гуараны (). Из протестированных концентраций наиболее эффективная стимуляция происходила выше 0,003 мМ, при этом значительная стимуляция происходила при 0,01 мМ (р = 0,02), 0,1 мМ (р = 0,008) и 1,0 мМ (р = 0,006). Экстракт семян гуараны в концентрации 10 мМ подавлял подвижность планарии (10) и вызывал многократное скручивание червей во время теста. Чтобы определить, обеспечит ли более длительное воздействие гуараны дополнительную стимуляцию или позволит более низким концентрациям воздействовать, мы наблюдали подвижность планарии через один час в 0.001, 0,003, 0,01, 0,03 и 0,1 мМ экстракта семян гуараны (). Как и при двухминутном воздействии, через час не наблюдалось значительной стимуляции подвижности планарий при 0,001 и 0,003 мМ. Мы по-прежнему наблюдали значительное увеличение активности при 0,01 мМ (p = 0,009), но эффект был потерян при 0,1 мМ.

Скорость движения планарии (pLmV) увеличивается в ответ на прием только гуараны.

Показаны выбранные данные pLmV относительно контролей, получавших только воду, для Dugesia tigrina , подвергшихся воздействию различных концентраций экстракта гуараны.Планарий приучали к соответствующим условиям либо в течение 2 минут (а), либо в течение 1 часа (б) до того, как отслеживали их активность pLmV. Подвижность планарии контролировали после того, как червей помещали в чашку Петри, содержащую соответствующую концентрацию экстракта семян гуараны, после тестируемого периода привыкания. Чашки Петри помещали на миллиметровую бумагу и в течение трех минут следили за количеством пересеченных линий сетки. Белая полоса представляет собой нормализованное контрольное значение pLmV, а черные столбцы указывают относительные значения pLmV для контрольного теста.Столбики погрешностей указывают на стандартное отклонение, а * указывает на p-значение менее 0,05 по сравнению с контролем только с водой.

В связи с тем, что наши результаты показали, что гуарана обеспечивает значительно большую стимуляцию подвижности планарий, мы продолжили тестировать влияние очищенного кофеина на pLmV. Поскольку другие исследователи определили, что кофеин не обеспечивает значительной стимуляции подвижности планарии, мы стремились использовать систему, чтобы оценить, обеспечивает ли гуарана дополнительный стимул по сравнению с одним кофеином [47, 50].Однако было необходимо определить, обеспечивают ли наша система и выбор видов планарий сопоставимый фон с этими опубликованными отчетами. Опять же, мы начали с тестирования подвижности планарии, используя диапазон концентраций кофеина (0,001, 0,003, 0,01, 0,03, 0,1, 0,3, 1,0, 3,0 и 10 мМ) после двухминутного периода воздействия (). Хотя подвижность планарии была немного повышена при концентрациях от 0,003 мМ до 3,0 мМ, мы не наблюдали какого-либо значительного увеличения общей активности планарии по сравнению с контрольной группой, получавшей только воду.Однако, поскольку рассчитанное p-значение для pLmV с использованием 0,001 мМ кофеина составило 0,05, что предполагает пограничную значимость, мы проверили, будут ли даже более низкие концентрации кофеина вызывать значительный пик активности. С этой целью мы исследовали эффект как 0,0001, так и 0,0003 мМ кофеина, но по-прежнему не наблюдали какого-либо значительного увеличения стимуляции по сравнению с контролем без кофеина (не показано). Как и в случае с экстрактом гуараны, 10 мМ кофеина подавляли подвижность планарии (1) и приводили к устойчивым сокращениям в течение периода анализа.Эти результаты сравнивали с временем инкубации в один час (1). Как и в случае с экстрактом гуараны, мы исследовали 0,001, 0,003, 0,01, 0,03 и 0,1 мМ, но опять же, кофеин сам по себе не вызывал существенного повышения pLmV. Эти результаты подтвердили, что очищенный кофеин обеспечивает заметную, хотя и незначительную стимуляцию движения планарии в испытанных концентрациях.

Кофеин сам по себе не способствует значительному увеличению скорости движения планарии (pLmV).

Показаны выбранные данные pLmV относительно контролей, получавших только воду, для Dugesia tigrina , подвергшихся воздействию различных концентраций кофеина.Планарий приучали к соответствующим условиям либо в течение 2 минут (а), либо в течение 1 часа (б) до того, как отслеживали их активность pLmV. Подвижность планарии контролировали после того, как червей помещали в чашку Петри, содержащую соответствующую концентрацию кофеина, после тестируемого периода привыкания. Чашки Петри помещали на миллиметровую бумагу и в течение трех минут следили за количеством пересеченных линий сетки. Белая полоса представляет собой нормализованное контрольное значение pLmV, а черные столбцы указывают относительные значения pLmV для контрольного теста.Столбики погрешностей указывают на стандартное отклонение, а * указывает на p-значение менее 0,05 по сравнению с контролем только с водой.

Чтобы определить, можно ли добиться дополнительного стимулирующего эффекта за счет сочетания кофеина и гуараны, мы использовали растворы, содержащие как низкие, так и высокие концентрации кофеина и экстракта семян гуараны, и оценивали активность планарии после экспозиции в течение двух минут или одного часа ( ). Поскольку экстракт семян гуараны в концентрации 0,1 мМ обеспечивает самый высокий средний относительный pLmV в тестируемом диапазоне концентраций, мы выбрали эту концентрацию для нашей высококачественной комбинации с кофеином.Концентрация кофеина 0,1 мМ также обеспечивала наибольшую среднюю относительную стимуляцию (рассчитанную как 1,21) на верхнем пределе по сравнению с контролем только с водой, несмотря на то, что она была меньше, чем пиковая концентрация 0,001 мМ, выбранная для комбинаций нижнего предела, которая имела средний относительный pLmV 1,26 (+). Комбинация 0,001 мМ кофеина и экстракта семян гуараны не привела к значительному повышению показателей pLmV ни через две минуты, ни через час. Однако, используя более высокую концентрацию 0,1 мМ для обоих растворов, мы наблюдали увеличение скорости движения через две минуты, но не через один час ().Среднее относительное значение pLmV при использовании комбинированного раствора после двухминутного воздействия было несколько выше, чем при использовании только экстракта гуараны, 1,55 () против 1,44 () соответственно. Эти два набора данных значительно отличались друг от друга с p-значением 0,006. Наши результаты показали, что гуарана обеспечивает дополнительный уровень стимуляции по сравнению с кофеином.

Гуарана поддерживает дополнительную кратковременную стимуляцию скорости движения планарии (pLmV) по сравнению с одним только кофеином.

Показаны данные pLmV относительно контролей, получавших только воду, для Dugesia tigrina , подвергшихся воздействию комбинации 0,001 мМ экстракта семян гуараны и 0,001 мМ кофеина (серые столбцы) или 0,1 мМ экстракта гуараны и 0,001 мМ кофеина (черные столбцы). Планарий приучали к соответствующим условиям либо в течение 2 минут, либо в течение 1 часа, как указано, до того, как отслеживали их активность pLmV. Подвижность планарии контролировали после того, как червей помещали в чашку Петри, содержащую соответствующие концентрации экстракта семян гуараны и кофеина, после тестируемого периода привыкания.Чашки Петри помещали на миллиметровую бумагу и в течение трех минут следили за количеством пересеченных линий сетки. Белая полоса представляет собой нормализованное контрольное значение pLmV, а черные столбцы указывают относительные значения pLmV для контрольного теста. Столбики погрешностей указывают на стандартное отклонение, а * указывает на p-значение менее 0,05 по сравнению с контролем только с водой.

Низкие концентрации глюкозы поддерживают долгосрочную стимуляцию гуараной

Поскольку сахар также является основным ингредиентом большинства энергетических напитков, мы далее оценили, как глюкоза влияет на стимуляцию гуараной и кофеином.Для начала мы определили, сколько сахара содержится в этих напитках, изучив список ингредиентов на упаковках. Часто содержание сахара не сообщалось полностью или просто указывалось как «сахар», без предоставления подробной информации о том, какой именно сахар учитывался. Кроме того, если был указан тип сахара, часто сообщалось о разных количествах для каждого из них — сахарозы, фруктозы и глюкозы. Также было обнаружено, что «специальные смеси» содержат дополнительный сахар без раскрытия концентрации. Мы также оценивали диапазоны концентраций с помощью онлайн-ресурсов [55, 57].Мы решили использовать глюкозу в качестве стандарта сахара, потому что это наиболее легко метаболизируемый сахар, и определили, что концентрация сахара колеблется от 290 до 730 мМ. Затем мы рассчитали среднюю концентрацию сахара, указанную на упаковках с напитками, как 561 мМ, которую мы приняли за глюкозу. Мы использовали этот рисунок для приготовления нашего стандартного маточного раствора. Как и в случае с гуараной и кофеином, мы провели исследование pLmV, используя только глюкозу после экспозиции в течение двух минут и одного часа (2). Концентрация 561 мМ оказалась ингибирующей передвижение планарии, что определялось повторяющимся поведением скручивания, и поэтому мы провели наши эксперименты с серией концентраций глюкозы ниже этого значения (0.561, 1,683, 5,61, 16,83, 56,1, 168,3 и 561 мМ). Мы не обнаружили какого-либо значительного увеличения pLmV при использовании любой из этих концентраций после двухминутного или одночасового периода воздействия. Однако мы обнаружили пик средней относительной стимуляции 1,22 при 5,61 мМ после двухминутного привыкания. Это значительно отличалось от среднего относительного pLmV 0,92 при 0,561 мМ с p-значением p = 6,0×10 -6 (). Напротив, средние относительные двигательные скорости для концентраций глюкозы, протестированные после одночасового воздействия глюкозы (), не привели к каким-либо заметным пикам стимуляции выше контроля с водой, несмотря на значительную разницу между 0.561 и 5,61 мМ (средний относительный pLmV 1,15 и 1,17 соответственно; p = 0,011).

Глюкоза сама по себе не способствует значительному увеличению двигательной скорости планарии (pLmV).

Показаны выбранные данные pLmV относительно контролей, получавших только воду, для Dugesia tigrina , подвергшихся воздействию различных концентраций глюкозы. Планарий приучали к соответствующим условиям либо в течение 2 минут (а), либо в течение 1 часа (б) до того, как отслеживали их активность pLmV. Подвижность планарии контролировали после помещения червей в чашку Петри, содержащую соответствующую концентрацию глюкозы, после тестируемого периода привыкания.Чашки Петри помещали на миллиметровую бумагу и в течение трех минут следили за количеством пересеченных линий сетки. Белая полоса представляет собой нормализованное контрольное значение pLmV, а черные столбцы указывают относительные значения pLmV для контрольного теста. Столбики погрешностей указывают на стандартное отклонение, а * указывает на p-значение менее 0,05 по сравнению с контролем только с водой.

Затем мы оценили, как комбинация гуараны с глюкозой влияет на pLmV, используя низкие и высокие концентрации после двухминутного и одночасового воздействия ().На нижнем уровне, при концентрации 0,001 мМ экстракта гуараны, дополненного 0,561 мМ глюкозы, мы наблюдали значительное увеличение подвижности через один час (p = 1,5×10 -4 ). Важно отметить, что ни экстракт гуараны, ни глюкоза сами по себе не оказывали значительной стимуляции в этот момент времени при 0,001 мМ или 0,561 мМ соответственно. Это говорит о том, что при низких концентрациях глюкоза оказывает поддерживающее действие на стимуляцию гуараной в течение более длительного периода времени. Напротив, этот эффект не был очевиден при использовании комбинированной высококонцентрированной концентрации, состоящей из 0.1 мМ гуараны и 5,61 мМ глюкозы, что на самом деле слегка подавляло подвижность планарии в среднем после одночасового периода воздействия. Вместо этого высокие данные о концентрации привели к значительной стимуляции через две минуты (p = 0,032). Примечательно, что гуарана действительно обеспечивала стимуляцию в качестве отдельного реагента через две минуты при концентрации 0,1 мМ со средним относительным pLmV 1,44 по сравнению с контролем с водой (), а с глюкозой это значение фактически снизилось до pLmV 1,24 по сравнению с контролем ( ).Статистический анализ показал, что двухминутные однократные данные гуараны при 0,1 мМ и комбинированные данные высокой концентрации с использованием экстракта гуараны и глюкозы значительно отличались друг от друга (p = 1,0×10 -7 ).

Глюкоза поддерживает стимуляцию гуараной двигательной скорости планарии (pLmV).

Показаны данные pLmV относительно контролей, получавших только воду, для Dugesia tigrina , подвергшихся воздействию комбинации 0,001 мМ экстракта семян гуараны и 0,561 мМ глюкозы (серые столбцы), или 0.Экстракт семян гуараны 1 мМ и глюкоза 5,61 мМ (черные столбцы). Планарий приучали к соответствующим условиям либо в течение 2 минут, либо в течение 1 часа, как указано, до того, как отслеживали их активность pLmV. Подвижность планарии контролировали после того, как червей помещали в чашку Петри, содержащую соответствующие концентрации экстракта гуараны и глюкозы, после тестируемого периода привыкания. Чашки Петри помещали на миллиметровую бумагу и в течение трех минут следили за количеством пересеченных линий сетки.Белая полоса представляет собой нормализованное контрольное значение pLmV, а черные столбцы указывают относительные значения pLmV для контрольного теста. Столбики погрешностей указывают на стандартное отклонение, а * указывает на p-значение менее 0,05 по сравнению с контролем только с водой.

Напротив, после дополнительной оценки кофеина и глюкозы () мы не наблюдали увеличения скорости движения планарии ни при низких, ни при высоких концентрациях в течение инкубационного периода продолжительностью две минуты и один час.Эти результаты еще раз подчеркнули потенциальную разницу между гуараной и кофеином в том, что реакция на глюкозу была разной между двумя стимуляторами.

Глюкоза не усиливает действие кофеина на скорость движения планарии (pLmV).

Показаны данные pLmV относительно контролей, получавших только воду, для Dugesia tigrina , подвергшихся воздействию комбинации 0,001 мМ кофеина и 0,561 мМ глюкозы (серые столбцы) или 0,1 мМ кофеина и 5,61 мМ глюкозы (черные столбцы). Планарий приучали к соответствующим условиям либо в течение 2 минут, либо в течение 1 часа, как указано, до того, как отслеживали их активность pLmV.Подвижность планарии контролировали после того, как червей помещали в чашку Петри, содержащую соответствующие концентрации кофеина и глюкозы, после тестируемого периода привыкания. Чашки Петри помещали на миллиметровую бумагу и в течение трех минут следили за количеством пересеченных линий сетки. Белая полоса представляет собой нормализованное контрольное значение pLmV, а черные столбцы указывают относительные значения pLmV для контрольного теста. Столбики погрешностей указывают на стандартное отклонение, а * указывает на p-значение меньше 0.05 по сравнению с контролем только на воде.

Гуарана в сочетании с глюкозой и кофеином обеспечивает краткосрочный стимул при низких концентрациях

При оценке скорости движения с использованием экстракта семян гуараны вместе с кофеином и глюкозой () каждая гуарана и кофеин с 0,561 мМ глюкозы) всего через две минуты привыкания (p = 0,041). Важно отметить, что мы не обнаружили стимуляции низкой концентрации через две минуты с двойными комбинациями экстракта семян гуараны и кофеина, экстракта семян гуараны и глюкозы или кофеина и глюкозы (рис. 1 и 2 соответственно).Это говорит о том, что некоторое стимулирующее действие может быть достигнуто за счет комбинации всех трех веществ, которое могло бы не проявляться иначе при более низких концентрациях любого из трех веществ по отдельности или в паре в течение короткого времени. Значимый стимул низкой концентрации сохранялся в течение одного часа, хотя и на более низком уровне, со средним относительным значением стимуляции 1,21 по сравнению с 1,36, которое наблюдалось через две минуты (p = 0,016). Но мы также наблюдали средний относительный стимул низкой концентрации с экстрактом гуараны при 0.0,001 мМ в сочетании с 0,561 мМ глюкозы при 1,31 (1,31) в час, что было больше, чем при добавлении кофеина в тройную комбинацию, что свидетельствует о том, что кофеин может не способствовать одночасовой тройной комбинированной стимуляции pLmV при низкие концентрации.

Гуарана с глюкозой и кофеином поддерживает двигательную скорость планарии (pLmV) при низких концентрациях.

Показаны данные pLmV относительно контролей, получавших только воду, для Dugesia tigrina , подвергшихся воздействию комбинации 0.0,001 мМ экстракта семян гуараны, 0,001 мМ кофеина и 0,561 мМ глюкозы (серые столбцы) или 0,1 мМ экстракта семян гуараны, 0,1 мМ кофеина и 5,61 мМ глюкозы (черные столбцы). Планарий приучали к соответствующим условиям либо в течение 2 минут, либо в течение 1 часа, как указано, до того, как отслеживали их активность pLmV. Подвижность планарии контролировали после того, как червей помещали в чашку Петри, содержащую соответствующие концентрации экстракта гуараны, кофеина и глюкозы, после тестируемого периода привыкания.Чашки Петри помещали на миллиметровую бумагу и в течение трех минут следили за количеством пересеченных линий сетки. Белая полоса представляет собой нормализованное контрольное значение pLmV, а черные столбцы указывают относительные значения pLmV для контрольного теста. Столбики погрешностей указывают на стандартное отклонение, а * указывает на p-значение менее 0,05 по сравнению с контролем только с водой.

Напротив, несмотря на наблюдаемое улучшение pLmV по сравнению с контролем, когда планарии подвергались воздействию комбинации экстракта семян гуараны и кофеина в более высоких концентрациях (0.1 мМ каждого; ) и комбинации экстракта гуараны и глюкозы (0,1 мМ экстракта семян гуараны и 5,61 мМ глюкозы; ) уже через две минуты мы не наблюдали значительной дополнительной стимуляции при использовании более высоких концентраций всех трех веществ (0,1 мМ для обоих семян гуараны). экстракт и кофеин, с 5,61 мМ глюкозы) после кратковременного двухминутного воздействия. Эти данные свидетельствуют о том, что краткосрочная польза достигается с гуараной, кофеином и глюкозой, но при комбинировании в более низких концентрациях.

Обсуждение

Энергетические напитки обычно содержат кофеин и сахар в качестве основных активных ингредиентов. Но многие популярные бренды также содержат смеси других веществ, которые якобы обеспечивают дополнительный стимул. Одной из таких все более распространенных добавок является гуарана. В этом исследовании мы задались вопросом, может ли гуарана оказывать дополнительный стимулирующий эффект по сравнению с одним только кофеином, используя анализ двигательной активности планарии (pLmV) [42, 43]. Сообщения, предполагающие, что кофеин не оказывает существенного влияния на активность планарии, поддержали наш выбор модельной системы, поскольку она позволила нам обнаружить тонизирующие эффекты компонентов семян гуараны отдельно от эффектов, обеспечиваемых кофеином [47, 50].В связи с тем, что кофеин обычно считается ответственным за стимулирующие свойства гуараны, мы использовали заявленное пятипроцентное содержание кофеина в семенах гуараны и типичный диапазон концентраций кофеина, указанный для большинства составов энергетических напитков, в качестве отправной точки для нашей работы. концентрации гуараны [19, 30, 55, 56].

При сравнении концентраций кофеина и гуараны на подвижность планарии действительно было очевидно, что кофеин не вызывал значительного увеличения pLmV ни при каких протестированных концентрациях, в то время как гуарана оказывала положительный эффект в диапазоне концентраций от 0.01 до 1,0 мМ (рис. и ). Примечательно, что средний относительный pLmV для каждой из концентраций кофеина выше 0,1 мМ после двухминутного привыкания, хотя и незначительно отличается от контроля с водой, имеет тенденцию к снижению и значительно выше 1,0 мМ, в том смысле, что p-значения между эти различные концентрации кофеина были менее 0,05 (+). Это контрастировало с результатами для одного только экстракта гуараны через две минуты, когда мы наблюдали пик стимуляции при использовании концентрации 0.1 мМ, но с сохранением значительного стимулирующего воздействия по сравнению с водными контролями даже при десятикратно более высокой концентрации (). Если бы мы выбрали менее консервативное содержание кофеина для нашего порошка семян гуараны, например, верхнюю оценку содержания кофеина в 10 процентов (удвоив нашу оценку), наша верхняя предельная концентрация 1,0 мМ была бы порядка 2,0 мМ кофеина и имела бы гораздо более высокий средний относительный pLmV по сравнению с одним кофеином. Таким образом, поскольку данные для кофеина и экстракта гуараны не соответствуют одному и тому же общему образцу активности, это также предполагает, что гуарана обеспечивает другое стимулирующее значение, отличное от кофеина.

Анализ данных pLmV, собранных после одночасового привыкания к одному кофеину, не выявил признаков стимуляции при любой тестируемой концентрации, что указывает на то, что даже тенденция к низкому уровню стимуляции, хотя и не значительно больше, чем контрольная вода, была короткой. -термин эффект (). В противоположность этому, данные, полученные через час после воздействия pLmV, подвергнутого воздействию экстракта семян гуараны, показали значительный стимул при 0,01 мМ, но не при 0,1 мМ (10). Эти результаты, полученные с помощью гуараны, показали, что более долгосрочный стимул может поддерживаться при более низких концентрациях, что является дополнительным доказательством в поддержку разницы между стимуляцией гуараной и кофеином.В целом, однако, мы предполагаем, что одночасовые данные как для кофеина, так и для гуараны указывают на то, что реакция типа толерантности возникает при длительном воздействии более высоких концентраций этих стимуляторов. Важно отметить, что другие исследователи заметили, что планарии лучше всего реагируют на стимуляторы в течение первых пяти минут воздействия, что также отражено в наших выводах [50].

Наши данные о двигательной активности, сочетающие выбранные низкие и высокие концентрации экстракта семян гуараны и кофеина (), показали, что гуарана обеспечивает дополнительную стимуляцию по сравнению с тем, что обеспечивается одним кофеином.Ни экстракт семян гуараны, ни кофеин сами по себе не обеспечивали заметного увеличения pLmV в качестве отдельного стимулятора при низкой исследованной концентрации (0,001 мМ, рис. и , соответственно), и это не изменилось при комбинировании веществ (). Но при комбинировании более высоких концентраций 0,1 мМ наблюдалось увеличение относительной средней подвижности после кратковременного двухминутного воздействия (2). Этот средний относительный pLmV был выше, чем тот, который наблюдался только для экстракта гуараны, что указывает на дополнительную кратковременную стимуляцию за счет комбинации более высоких концентраций гуараны и кофеина.Кроме того, поскольку такой аддитивный эффект не наблюдался при простом увеличении концентрации кофеина (), дополнительная стимуляция, обеспечиваемая экстрактом семян гуараны, может быть обеспечена каким-либо другим водорастворимым ингредиентом в семенах, который функционирует с использованием метаболического пути, отличного от используемого. кофеином. Примечательно, что другая группа, изучавшая влияние гуараны на мышей, также наблюдала увеличение активности, которое, вероятно, действовало с использованием механизма, отличного от механизма, используемого кофеином [20].Подтверждая нашу гипотезу о том, что гуарана обладает стимулирующими свойствами независимо от кофеина, этот подтверждающий результат также поддерживает использование планарии для исследований, связанных со стимулирующими эффектами в системах млекопитающих.

Предполагается, что стимулирующий эффект кофеина опосредуется рядом механизмов, включая внутриклеточную мобилизацию кальция, ингибирование фосфодиэстераз, связывание кофеина с бензодиазепиновыми рецепторами и антагонизм на уровне аденозиновых рецепторов [58, 59] .В то время как кофеин в гуаране, вероятно, работает по этим механизмам, другие компоненты, возможно, действуют по другим путям. Известно, что в дополнение к кофеину семена гуараны содержат ряд других возможных стимуляторов, таких как катахины, дубильные вещества и другие алкалоиды, такие как теофиллин и теобромин [19, 22, 30, 60]. В настоящее время имеется мало информации о преимуществах одного из этих ингредиентов перед другими.

Мы расширили нашу работу, чтобы рассмотреть влияние сахара на pLmV в сочетании с кофеином и нашим экстрактом семян гуараны.Конкретные сахара в разновидностях энергетических напитков различаются, поэтому в нашем исследовании мы решили работать с D-глюкозой или декстрозой. Не все производители энергетических напитков раскрывают полные концентрации сахаров в своих рецептурах, поэтому мы рассчитали среднюю концентрацию для использования в наших экспериментах. Мы получили это значение, усреднив количество сахара, указанное на нескольких контейнерах, которые давали некоторые сведения об общем количестве содержащихся в них сахаров. Мы сравнили это количество с оценками общего содержания сахара в энергетических напитках, обнаруженными в Интернете, которые были отражены в выбранной нами концентрации запасов [55, 57].Хотя мы наблюдали, что глюкоза сама по себе не вызывала очевидной стимуляции подвижности планарии (1), она действительно поддерживала стимуляцию гуараной при низких концентрациях в течение более длительного времени (12). Это особенно интересно тем, что ни одна глюкоза (1), ни экстракт семян гуараны (1) не приводили к увеличению pLmV после одночасового привыкания к этим концентрациям. Мы также наблюдали значительную кратковременную относительную среднюю стимуляцию при комбинировании высоких концентраций глюкозы и экстракта семян гуараны (), но поскольку только экстракт семян гуараны приводил к значительному увеличению pLmV () через тот же период времени, было невозможно определить, усилила ли глюкоза этот эффект, используя нашу систему.Но наши данные свидетельствуют о том, что при низких концентрациях глюкоза оказывает поддерживающее действие на стимуляцию гуараной в течение более длительных периодов времени. Эти данные согласуются с опубликованными сообщениями о том, что глюкоза может поддерживать эффект стимуляторов в модели планарии [48]. И наоборот, наши комбинации глюкозы и кофеина не приводили к увеличению подвижности планарии ни в один из исследованных моментов времени (2), что является дополнительным свидетельством стимулирующих свойств гуараны, которые действительно отличаются от свойств кофеина.

Совместное воздействие на планарий экстракта семян гуараны, кофеина и глюкозы привело к усилению подвижности планарий как после краткосрочной, так и при длительной стимуляции, но только при нашей комбинации с низкой концентрацией (). Однако, поскольку наша низкая концентрация экстракта семян гуараны в сочетании с низкой концентрацией глюкозы также обеспечивала устойчивую значительную стимуляцию после одночасовой инкубации, мы не можем сделать вывод, что кофеин оказывал дополнительный эффект в этой ситуации. С другой стороны, тройная комбинация была единственной протестированной, которая привела к увеличению pLmV уже после двух минут воздействия стимулятора.Примечательно, что эти данные свидетельствуют о том, что низкие концентрации гуараны, кофеина и глюкозы в сочетании достаточны для обеспечения краткосрочного стимула.

Мы повторяем, что, поскольку и кофеин, и глюкоза обеспечивают лишь низкий уровень стимуляции в модели планарии, мы смогли обнаружить возможность других стимулирующих веществ в экстракте семян гуараны и оценить, могут ли кофеин и глюкоза усиливать эти эффекты. Будущие исследования потребуются для определения фактического дополнительного стимулятора, содержащегося в гуаране [19].Но наше общее впечатление от этой работы состоит в том, что гуарана предлагает дополнительную стимуляцию по сравнению с кофеином, и что как кофеин, так и глюкоза могут изменить характер этой стимуляции. Очевидно, что для полной оценки того, как энергетические напитки влияют на физиологию, важно учитывать комбинацию содержащихся в них заместителей, поскольку эти вещества могут вести себя по-разному при смешивании вместе в одной и той же рецептуре. Действительно, другие также выдвинули идею изучения комбинаций компонентов энергетических напитков на человеческих моделях [9, 18, 25, 61], но, учитывая сложности контроля пищевых привычек человека, особенно когда речь идет о кофеине, мы предполагаем, что планарий system предлагает простой первый подход к изучению этих сложных взаимодействий.Также следует отметить, что наши наблюдения, сделанные при комбинировании экстракта семян гуараны, кофеина и глюкозы, показали краткосрочную пользу в низких концентрациях, противоречащую общему мнению, что «чем больше, тем лучше» в рецептурах энергетических напитков. Требуются дальнейшие исследования, но наши предварительные результаты с использованием модели планарии показывают, что более низкие дозы стимуляторов могут работать вместе, чтобы обеспечить краткосрочный стимулирующий эффект, и что сочетание большего количества этих ингредиентов может не дать долгосрочной пользы.

Гуарана обеспечивает дополнительную стимуляцию по сравнению с одним только кофеином в модели Planaria

Abstract

Стимулирующий эффект энергетических напитков в первую очередь объясняется содержащимся в них кофеином. Многие энергетические напитки также содержат другие ингредиенты, которые могут усилить тонизирующий эффект этих напитков с кофеином. Одной из таких добавок является гуарана. Гуарана — это вьющееся растение, произрастающее в бассейне Амазонки, в семенах которого содержится примерно в четыре раза больше кофеина, чем в кофейных зернах.Считается, что смесь других природных химических веществ, содержащихся в семенах гуараны, усиливает стимулирующее действие гуараны по сравнению с одним лишь кофеином. Тем не менее, несмотря на растущее использование гуараны в качестве добавки к энергетическим напиткам и растущий рынок ее в качестве пищевой добавки, наука, изучающая гуарану и то, как она влияет на другие пищевые ингредиенты, отсутствует. Чтобы оценить стимулирующие эффекты гуараны и других натуральных продуктов, необходима простая модель для исследования их физиологических свойств.Планария обеспечивает такую ​​систему. Было показано, что локомоторная активность и судорожная реакция планарий на воздействие вещества представляют собой превосходную систему для измерения эффектов стимуляции лекарствами, зависимости и отмены. Чтобы оценить стимулирующее действие гуараны, мы изучили, как она влияет на двигательную активность планарий вида Dugesia tigrina . Мы сообщаем о доказательствах того, что семена гуараны обеспечивают дополнительную стимуляцию по сравнению с одним только кофеином, и документируем изменения этой стимуляции в контексте как кофеина, так и глюкозы.

Введение

Кофеин считается основным стимулирующим компонентом энергетических напитков, в то время как сахара и другие вещества, такие как гуарана, таурин и женьшень, добавляются, часто в сочетании с витаминами, для приготовления различных смесей [1, 2]. Энергетические напитки стали признанным средством для повышения когнитивных способностей, памяти, бдительности, физической работоспособности и сердечно-сосудистой деятельности [3–10]. Но хотя потребление энергетических напитков продолжает расти, высказываются опасения по поводу высокого содержания в них кофеина, а вместе с этим и рисков, связанных с их потреблением, особенно молодыми людьми [1, 8, 11–15].Использование гуараны и других материалов на растительной основе может еще больше увеличить содержание кофеина и общие стимулирующие свойства этих напитков, но, поскольку они считаются растительными добавками, на эти добавки на растительной основе не распространяются те же требования к отчетности, что и на сахар и кофеин. Следовательно, концентрация этих добавок, не говоря уже о том, что они могут содержать, обычно не указывается в рецептурах энергетических напитков. Это непонимание ставит под вопрос, как комбинация полученных ингредиентов может работать вместе, чтобы повлиять на здоровье тех, кто потребляет содержащие их продукты [2, 12–14, 16–18].

Гуарана ( Paullinia cupana ) — вид вьющегося растения, произрастающего в Амазонии, который известен как антиоксидант, традиционное лекарственное средство и эффективный стимулятор [19–25]. В недавней работе также изучалось использование гуараны для борьбы с усталостью и депрессией, связанными с лечением рака [26–28]. Основным компонентом гуараны, которому приписывают эти полезные свойства, является кофеин, который, в зависимости от способа приготовления экстракта, может более чем в четыре раза превышать количество, содержащееся в кофейных зернах [19, 29].Кроме того, считается, что другие компоненты семян гуараны обладают дополнительным стимулирующим эффектом по сравнению с одним только кофеином [19–23, 30]. Таким образом, растительные продукты, такие как гуарана, являются привлекательной добавкой для производителей многих популярных составов энергетических напитков, несмотря на отсутствие исследований, посвященных ассоциативным свойствам растительных экстрактов с другими пищевыми добавками, лекарствами и стимуляторами [29].

Чтобы оценить роль гуараны как стимулятора по сравнению с одним только кофеином, мы разработали простую, легко управляемую систему, используя планарию Dugesia tigrina , свободноживущего водного плоского червя, в качестве модельного организма.Планарий чаще всего используют в исследованиях, направленных на регенерацию и восстановление тканей, благодаря их исключительной регенеративной способности [31]. Планарии также хорошо подходят для изучения стимуляторов, потому что они обладают базовой билатеральной симметрией и соответствующей центральной нервной системой, которая использует системы нейротрансмиттеров, сравнимые с обнаруженными у млекопитающих [32-39]. Планарии предпочитают темноту и используют фоторецепторы, чтобы обнаруживать свет и реагировать на него. Таким образом, планарии способны обучаться в лабиринтах и ​​могут вырабатывать условный ответ на свет, который может быть реализован в поведенческих исследованиях, в том числе при модификации лекарств [40, 41].Анализы подвижности планарии также были разработаны для исследований зависимости от психоактивных веществ и отмены [42–53]. Поскольку анализ подвижности планарии предлагает простую, легко контролируемую систему для мониторинга воздействия раздражителей, мы приняли этот анализ для использования в нашем исследовании гуараны. Предыдущие исследования также показали, что кофеин не вызывает значительного увеличения активности планарии [47, 50]. Это наблюдение послужило дополнительным стимулом для использования планарии в нашей работе, поскольку оно дает благоприятный фон для изучения тонизирующих эффектов гуараны отдельно от эффектов кофеина.

Наблюдая за изменениями в подвижности планарии при воздействии гуараны, кофеина и глюкозы, мы определили, что семена гуараны содержат дополнительный стимулятор по сравнению с одним только кофеином, и что глюкоза может поддерживать эти тонизирующие эффекты. Мы также предоставляем доказательства того, что гуарана дает краткосрочную дополнительную пользу в сочетании с кофеином. Наши данные также свидетельствуют о том, что комбинация гуараны, кофеина и глюкозы обеспечивает кратковременный стимул при низких концентрациях.

Материалы и методы

Разведение планарий

Планарий ( Dugesia tigrina ) были приобретены у компании Carolina Biological Supply Company (132954; Берлингтон, Северная Каролина).Этот вид также упоминается как Girardia tigrina [54]. Запасы содержали в темноте с использованием родниковой воды (Poland Spring), в которую часто добавляли 0,5 мМ NaHCO 3 . Для хранения образцов использовались пластиковые контейнеры для хранения пищевых продуктов с приоткрытыми крышками. Планариям давали возможность акклиматизироваться за одну неделю до кормления или экспериментов. В качестве пищи использовались органические яйца, сваренные вкрутую. Дважды в неделю небольшое количество яичного белка и желтка измельчали ​​и помещали в контейнеры.Планарии кормили ad libidum в течение одного-двух часов. Затем планарий переносили в свежие контейнеры и родниковую воду (Poland Spring). Культуральную воду меняли на следующий день, чтобы удалить мусор и сохранить воду свежей.

Тест скорости движения планарии (pLmV)

Тест скорости движения планарии (pLmV), установленный R.B. Raffa и S.M. Rawls был адаптирован для этого исследования [42, 43]. Вкратце, планарий приучали к соответствующему тестируемому веществу или комбинации в соответствующей концентрации либо в течение двух минут, либо в течение одного часа.Затем червей переносили в центр чашки Петри диаметром 10 см, помещенной на бумагу с сеткой, с линиями на расстоянии 0,5 см друг от друга, содержащей 20 мл того же испытуемого раствора. Подвижность планарии контролировали в течение 3 минут, оценивая количество пересеченных линий сетки. Испытываемые концентрации считались слишком высокими, если черви демонстрировали скручивание или судорожное поведение в течение периода привыкания. Каждое экспериментальное состояние тестировали не менее трех раз, и каждое испытание обычно проводили трижды, если не больше, так что окончательные данные pLmV оценивали с использованием по меньшей мере девяти червей для каждого условия.Для каждого теста исходные растворы экстракта гуараны, кофеина или глюкозы разводили в родниковой воде. Были предприняты меры для проведения тестов в разное время дня, чтобы учесть различные уровни зарождающейся или циркадной активности. Каждый набор тестов проводили два или три разных опытных экспериментатора. Не обнаружено заметного изменения качества воды, такого как pH, в результате применения исследуемых веществ в исследованных концентрациях. Каждый червь, включая контрольные экземпляры, использовался только один раз.

Стандартные растворы

Все растворы были приготовлены с использованием дистиллированной воды.Кофеин был приобретен у Sigma Aldrich (C7731; Сент-Луис, Миссури) и был приготовлен в виде исходного раствора с концентрацией 10 мМ или 1 мМ. D-глюкозу или декстрозу также получали от Sigma Aldrich (D9434; Сент-Луис, Миссури) в виде исходного раствора с концентрацией 561 мМ. Гуарана, использованная для этого исследования, была приобретена в Интернете в магазине Grass Hut Treasures (порошок цельных семян гуараны; www.grasshuttreasures.com/guarana/guaranapowder.html). Запасы гуараны были приготовлены на основе заявленного пятипроцентного содержания кофеина [19, 30]. Для приготовления 10 мМ и 1 мМ экстракта гуараны соответствующую массу порошка семян гуараны помещали в раствор, перемешивали в течение нескольких часов, а затем дважды фильтровали для удаления нерастворимого материала.Полученные экстракты гуараны охлаждали и хранили в бутылках, обернутых фольгой, чтобы защитить их от света.

Статистика

Все данные были нормализованы к соответствующим контролям и выражены как среднее +/- стандартное отклонение. Каждая точка данных была проанализирована с использованием двустороннего парного Т-критерия Стьюдента и считалась значимой, если соответствующее значение р было меньше 0,05.

Результаты

Гуарана обеспечивает дополнительную кратковременную стимуляцию по сравнению с одним только кофеином

Фактическая концентрация гуараны, присутствующей в энергетических напитках, обычно не сообщается, но кофеин считается основным стимулятором, присутствующим в семенах [19].Поэтому для приготовления растворов гуараны мы руководствовались опубликованными анализами содержания кофеина в семенах гуараны. Оцененное содержание кофеина в бобах гуараны варьировалось в зависимости от приготовления и метода анализа — от одного до двенадцати процентов — но обычно сообщалось, что оно составляет около пяти процентов [19, 24, 30]. Затем мы исследовали содержание кофеина в энергетических напитках, просматривая информацию, представленную на упаковках, и используя фиг. доступны на интернет-ресурсах. Эта информация использовалась для установления границ концентрации для наших тестов со стимуляторами [55, 56].Эти источники указывают на типичные концентрации кофеина в диапазоне от примерно 0,4 мМ до чуть более 2 мМ, поэтому мы выбрали диапазон концентраций, который соответствовал бы им и позволял нам свободно изучать комбинации как очищенного кофеина, так и гуараны, сохраняя при этом реалистичные концентрации кофеина. Выбранный диапазон охватывал от 0,001 до 10 мМ.

Тест скорости передвижения планарии (pLmV) был адаптирован для оценки стимулирующих свойств гуараны [42, 43]. Мы начали с тестирования набора концентраций, включая 0.001, 0,003, 0,01, 0,03, 0,1, 0,3, 1,0, 3,0 и 10 мМ и наблюдение за подвижностью планарии после двухминутного периода инкубации в экстракте семян гуараны (). Из протестированных концентраций наиболее эффективная стимуляция происходила выше 0,003 мМ, при этом значительная стимуляция происходила при 0,01 мМ (р = 0,02), 0,1 мМ (р = 0,008) и 1,0 мМ (р = 0,006). Экстракт семян гуараны в концентрации 10 мМ подавлял подвижность планарии (10) и вызывал многократное скручивание червей во время теста. Чтобы определить, обеспечит ли более длительное воздействие гуараны дополнительную стимуляцию или позволит более низким концентрациям воздействовать, мы наблюдали подвижность планарии через один час в 0.001, 0,003, 0,01, 0,03 и 0,1 мМ экстракта семян гуараны (). Как и при двухминутном воздействии, через час не наблюдалось значительной стимуляции подвижности планарий при 0,001 и 0,003 мМ. Мы по-прежнему наблюдали значительное увеличение активности при 0,01 мМ (p = 0,009), но эффект был потерян при 0,1 мМ.

Скорость движения планарии (pLmV) увеличивается в ответ на прием только гуараны.

Показаны выбранные данные pLmV относительно контролей, получавших только воду, для Dugesia tigrina , подвергшихся воздействию различных концентраций экстракта гуараны.Планарий приучали к соответствующим условиям либо в течение 2 минут (а), либо в течение 1 часа (б) до того, как отслеживали их активность pLmV. Подвижность планарии контролировали после того, как червей помещали в чашку Петри, содержащую соответствующую концентрацию экстракта семян гуараны, после тестируемого периода привыкания. Чашки Петри помещали на миллиметровую бумагу и в течение трех минут следили за количеством пересеченных линий сетки. Белая полоса представляет собой нормализованное контрольное значение pLmV, а черные столбцы указывают относительные значения pLmV для контрольного теста.Столбики погрешностей указывают на стандартное отклонение, а * указывает на p-значение менее 0,05 по сравнению с контролем только с водой.

В связи с тем, что наши результаты показали, что гуарана обеспечивает значительно большую стимуляцию подвижности планарий, мы продолжили тестировать влияние очищенного кофеина на pLmV. Поскольку другие исследователи определили, что кофеин не обеспечивает значительной стимуляции подвижности планарии, мы стремились использовать систему, чтобы оценить, обеспечивает ли гуарана дополнительный стимул по сравнению с одним кофеином [47, 50].Однако было необходимо определить, обеспечивают ли наша система и выбор видов планарий сопоставимый фон с этими опубликованными отчетами. Опять же, мы начали с тестирования подвижности планарии, используя диапазон концентраций кофеина (0,001, 0,003, 0,01, 0,03, 0,1, 0,3, 1,0, 3,0 и 10 мМ) после двухминутного периода воздействия (). Хотя подвижность планарии была немного повышена при концентрациях от 0,003 мМ до 3,0 мМ, мы не наблюдали какого-либо значительного увеличения общей активности планарии по сравнению с контрольной группой, получавшей только воду.Однако, поскольку рассчитанное p-значение для pLmV с использованием 0,001 мМ кофеина составило 0,05, что предполагает пограничную значимость, мы проверили, будут ли даже более низкие концентрации кофеина вызывать значительный пик активности. С этой целью мы исследовали эффект как 0,0001, так и 0,0003 мМ кофеина, но по-прежнему не наблюдали какого-либо значительного увеличения стимуляции по сравнению с контролем без кофеина (не показано). Как и в случае с экстрактом гуараны, 10 мМ кофеина подавляли подвижность планарии (1) и приводили к устойчивым сокращениям в течение периода анализа.Эти результаты сравнивали с временем инкубации в один час (1). Как и в случае с экстрактом гуараны, мы исследовали 0,001, 0,003, 0,01, 0,03 и 0,1 мМ, но опять же, кофеин сам по себе не вызывал существенного повышения pLmV. Эти результаты подтвердили, что очищенный кофеин обеспечивает заметную, хотя и незначительную стимуляцию движения планарии в испытанных концентрациях.

Кофеин сам по себе не способствует значительному увеличению скорости движения планарии (pLmV).

Показаны выбранные данные pLmV относительно контролей, получавших только воду, для Dugesia tigrina , подвергшихся воздействию различных концентраций кофеина.Планарий приучали к соответствующим условиям либо в течение 2 минут (а), либо в течение 1 часа (б) до того, как отслеживали их активность pLmV. Подвижность планарии контролировали после того, как червей помещали в чашку Петри, содержащую соответствующую концентрацию кофеина, после тестируемого периода привыкания. Чашки Петри помещали на миллиметровую бумагу и в течение трех минут следили за количеством пересеченных линий сетки. Белая полоса представляет собой нормализованное контрольное значение pLmV, а черные столбцы указывают относительные значения pLmV для контрольного теста.Столбики погрешностей указывают на стандартное отклонение, а * указывает на p-значение менее 0,05 по сравнению с контролем только с водой.

Чтобы определить, можно ли добиться дополнительного стимулирующего эффекта за счет сочетания кофеина и гуараны, мы использовали растворы, содержащие как низкие, так и высокие концентрации кофеина и экстракта семян гуараны, и оценивали активность планарии после экспозиции в течение двух минут или одного часа ( ). Поскольку экстракт семян гуараны в концентрации 0,1 мМ обеспечивает самый высокий средний относительный pLmV в тестируемом диапазоне концентраций, мы выбрали эту концентрацию для нашей высококачественной комбинации с кофеином.Концентрация кофеина 0,1 мМ также обеспечивала наибольшую среднюю относительную стимуляцию (рассчитанную как 1,21) на верхнем пределе по сравнению с контролем только с водой, несмотря на то, что она была меньше, чем пиковая концентрация 0,001 мМ, выбранная для комбинаций нижнего предела, которая имела средний относительный pLmV 1,26 (+). Комбинация 0,001 мМ кофеина и экстракта семян гуараны не привела к значительному повышению показателей pLmV ни через две минуты, ни через час. Однако, используя более высокую концентрацию 0,1 мМ для обоих растворов, мы наблюдали увеличение скорости движения через две минуты, но не через один час ().Среднее относительное значение pLmV при использовании комбинированного раствора после двухминутного воздействия было несколько выше, чем при использовании только экстракта гуараны, 1,55 () против 1,44 () соответственно. Эти два набора данных значительно отличались друг от друга с p-значением 0,006. Наши результаты показали, что гуарана обеспечивает дополнительный уровень стимуляции по сравнению с кофеином.

Гуарана поддерживает дополнительную кратковременную стимуляцию скорости движения планарии (pLmV) по сравнению с одним только кофеином.

Показаны данные pLmV относительно контролей, получавших только воду, для Dugesia tigrina , подвергшихся воздействию комбинации 0,001 мМ экстракта семян гуараны и 0,001 мМ кофеина (серые столбцы) или 0,1 мМ экстракта гуараны и 0,001 мМ кофеина (черные столбцы). Планарий приучали к соответствующим условиям либо в течение 2 минут, либо в течение 1 часа, как указано, до того, как отслеживали их активность pLmV. Подвижность планарии контролировали после того, как червей помещали в чашку Петри, содержащую соответствующие концентрации экстракта семян гуараны и кофеина, после тестируемого периода привыкания.Чашки Петри помещали на миллиметровую бумагу и в течение трех минут следили за количеством пересеченных линий сетки. Белая полоса представляет собой нормализованное контрольное значение pLmV, а черные столбцы указывают относительные значения pLmV для контрольного теста. Столбики погрешностей указывают на стандартное отклонение, а * указывает на p-значение менее 0,05 по сравнению с контролем только с водой.

Низкие концентрации глюкозы поддерживают долгосрочную стимуляцию гуараной

Поскольку сахар также является основным ингредиентом большинства энергетических напитков, мы далее оценили, как глюкоза влияет на стимуляцию гуараной и кофеином.Для начала мы определили, сколько сахара содержится в этих напитках, изучив список ингредиентов на упаковках. Часто содержание сахара не сообщалось полностью или просто указывалось как «сахар», без предоставления подробной информации о том, какой именно сахар учитывался. Кроме того, если был указан тип сахара, часто сообщалось о разных количествах для каждого из них — сахарозы, фруктозы и глюкозы. Также было обнаружено, что «специальные смеси» содержат дополнительный сахар без раскрытия концентрации. Мы также оценивали диапазоны концентраций с помощью онлайн-ресурсов [55, 57].Мы решили использовать глюкозу в качестве стандарта сахара, потому что это наиболее легко метаболизируемый сахар, и определили, что концентрация сахара колеблется от 290 до 730 мМ. Затем мы рассчитали среднюю концентрацию сахара, указанную на упаковках с напитками, как 561 мМ, которую мы приняли за глюкозу. Мы использовали этот рисунок для приготовления нашего стандартного маточного раствора. Как и в случае с гуараной и кофеином, мы провели исследование pLmV, используя только глюкозу после экспозиции в течение двух минут и одного часа (2). Концентрация 561 мМ оказалась ингибирующей передвижение планарии, что определялось повторяющимся поведением скручивания, и поэтому мы провели наши эксперименты с серией концентраций глюкозы ниже этого значения (0.561, 1,683, 5,61, 16,83, 56,1, 168,3 и 561 мМ). Мы не обнаружили какого-либо значительного увеличения pLmV при использовании любой из этих концентраций после двухминутного или одночасового периода воздействия. Однако мы обнаружили пик средней относительной стимуляции 1,22 при 5,61 мМ после двухминутного привыкания. Это значительно отличалось от среднего относительного pLmV 0,92 при 0,561 мМ с p-значением p = 6,0×10 -6 (). Напротив, средние относительные двигательные скорости для концентраций глюкозы, протестированные после одночасового воздействия глюкозы (), не привели к каким-либо заметным пикам стимуляции выше контроля с водой, несмотря на значительную разницу между 0.561 и 5,61 мМ (средний относительный pLmV 1,15 и 1,17 соответственно; p = 0,011).

Глюкоза сама по себе не способствует значительному увеличению двигательной скорости планарии (pLmV).

Показаны выбранные данные pLmV относительно контролей, получавших только воду, для Dugesia tigrina , подвергшихся воздействию различных концентраций глюкозы. Планарий приучали к соответствующим условиям либо в течение 2 минут (а), либо в течение 1 часа (б) до того, как отслеживали их активность pLmV. Подвижность планарии контролировали после помещения червей в чашку Петри, содержащую соответствующую концентрацию глюкозы, после тестируемого периода привыкания.Чашки Петри помещали на миллиметровую бумагу и в течение трех минут следили за количеством пересеченных линий сетки. Белая полоса представляет собой нормализованное контрольное значение pLmV, а черные столбцы указывают относительные значения pLmV для контрольного теста. Столбики погрешностей указывают на стандартное отклонение, а * указывает на p-значение менее 0,05 по сравнению с контролем только с водой.

Затем мы оценили, как комбинация гуараны с глюкозой влияет на pLmV, используя низкие и высокие концентрации после двухминутного и одночасового воздействия ().На нижнем уровне, при концентрации 0,001 мМ экстракта гуараны, дополненного 0,561 мМ глюкозы, мы наблюдали значительное увеличение подвижности через один час (p = 1,5×10 -4 ). Важно отметить, что ни экстракт гуараны, ни глюкоза сами по себе не оказывали значительной стимуляции в этот момент времени при 0,001 мМ или 0,561 мМ соответственно. Это говорит о том, что при низких концентрациях глюкоза оказывает поддерживающее действие на стимуляцию гуараной в течение более длительного периода времени. Напротив, этот эффект не был очевиден при использовании комбинированной высококонцентрированной концентрации, состоящей из 0.1 мМ гуараны и 5,61 мМ глюкозы, что на самом деле слегка подавляло подвижность планарии в среднем после одночасового периода воздействия. Вместо этого высокие данные о концентрации привели к значительной стимуляции через две минуты (p = 0,032). Примечательно, что гуарана действительно обеспечивала стимуляцию в качестве отдельного реагента через две минуты при концентрации 0,1 мМ со средним относительным pLmV 1,44 по сравнению с контролем с водой (), а с глюкозой это значение фактически снизилось до pLmV 1,24 по сравнению с контролем ( ).Статистический анализ показал, что двухминутные однократные данные гуараны при 0,1 мМ и комбинированные данные высокой концентрации с использованием экстракта гуараны и глюкозы значительно отличались друг от друга (p = 1,0×10 -7 ).

Глюкоза поддерживает стимуляцию гуараной двигательной скорости планарии (pLmV).

Показаны данные pLmV относительно контролей, получавших только воду, для Dugesia tigrina , подвергшихся воздействию комбинации 0,001 мМ экстракта семян гуараны и 0,561 мМ глюкозы (серые столбцы), или 0.Экстракт семян гуараны 1 мМ и глюкоза 5,61 мМ (черные столбцы). Планарий приучали к соответствующим условиям либо в течение 2 минут, либо в течение 1 часа, как указано, до того, как отслеживали их активность pLmV. Подвижность планарии контролировали после того, как червей помещали в чашку Петри, содержащую соответствующие концентрации экстракта гуараны и глюкозы, после тестируемого периода привыкания. Чашки Петри помещали на миллиметровую бумагу и в течение трех минут следили за количеством пересеченных линий сетки.Белая полоса представляет собой нормализованное контрольное значение pLmV, а черные столбцы указывают относительные значения pLmV для контрольного теста. Столбики погрешностей указывают на стандартное отклонение, а * указывает на p-значение менее 0,05 по сравнению с контролем только с водой.

Напротив, после дополнительной оценки кофеина и глюкозы () мы не наблюдали увеличения скорости движения планарии ни при низких, ни при высоких концентрациях в течение инкубационного периода продолжительностью две минуты и один час.Эти результаты еще раз подчеркнули потенциальную разницу между гуараной и кофеином в том, что реакция на глюкозу была разной между двумя стимуляторами.

Глюкоза не усиливает действие кофеина на скорость движения планарии (pLmV).

Показаны данные pLmV относительно контролей, получавших только воду, для Dugesia tigrina , подвергшихся воздействию комбинации 0,001 мМ кофеина и 0,561 мМ глюкозы (серые столбцы) или 0,1 мМ кофеина и 5,61 мМ глюкозы (черные столбцы). Планарий приучали к соответствующим условиям либо в течение 2 минут, либо в течение 1 часа, как указано, до того, как отслеживали их активность pLmV.Подвижность планарии контролировали после того, как червей помещали в чашку Петри, содержащую соответствующие концентрации кофеина и глюкозы, после тестируемого периода привыкания. Чашки Петри помещали на миллиметровую бумагу и в течение трех минут следили за количеством пересеченных линий сетки. Белая полоса представляет собой нормализованное контрольное значение pLmV, а черные столбцы указывают относительные значения pLmV для контрольного теста. Столбики погрешностей указывают на стандартное отклонение, а * указывает на p-значение меньше 0.05 по сравнению с контролем только на воде.

Гуарана в сочетании с глюкозой и кофеином обеспечивает краткосрочный стимул при низких концентрациях

При оценке скорости движения с использованием экстракта семян гуараны вместе с кофеином и глюкозой () каждая гуарана и кофеин с 0,561 мМ глюкозы) всего через две минуты привыкания (p = 0,041). Важно отметить, что мы не обнаружили стимуляции низкой концентрации через две минуты с двойными комбинациями экстракта семян гуараны и кофеина, экстракта семян гуараны и глюкозы или кофеина и глюкозы (рис. 1 и 2 соответственно).Это говорит о том, что некоторое стимулирующее действие может быть достигнуто за счет комбинации всех трех веществ, которое могло бы не проявляться иначе при более низких концентрациях любого из трех веществ по отдельности или в паре в течение короткого времени. Значимый стимул низкой концентрации сохранялся в течение одного часа, хотя и на более низком уровне, со средним относительным значением стимуляции 1,21 по сравнению с 1,36, которое наблюдалось через две минуты (p = 0,016). Но мы также наблюдали средний относительный стимул низкой концентрации с экстрактом гуараны при 0.0,001 мМ в сочетании с 0,561 мМ глюкозы при 1,31 (1,31) в час, что было больше, чем при добавлении кофеина в тройную комбинацию, что свидетельствует о том, что кофеин может не способствовать одночасовой тройной комбинированной стимуляции pLmV при низкие концентрации.

Гуарана с глюкозой и кофеином поддерживает двигательную скорость планарии (pLmV) при низких концентрациях.

Показаны данные pLmV относительно контролей, получавших только воду, для Dugesia tigrina , подвергшихся воздействию комбинации 0.0,001 мМ экстракта семян гуараны, 0,001 мМ кофеина и 0,561 мМ глюкозы (серые столбцы) или 0,1 мМ экстракта семян гуараны, 0,1 мМ кофеина и 5,61 мМ глюкозы (черные столбцы). Планарий приучали к соответствующим условиям либо в течение 2 минут, либо в течение 1 часа, как указано, до того, как отслеживали их активность pLmV. Подвижность планарии контролировали после того, как червей помещали в чашку Петри, содержащую соответствующие концентрации экстракта гуараны, кофеина и глюкозы, после тестируемого периода привыкания.Чашки Петри помещали на миллиметровую бумагу и в течение трех минут следили за количеством пересеченных линий сетки. Белая полоса представляет собой нормализованное контрольное значение pLmV, а черные столбцы указывают относительные значения pLmV для контрольного теста. Столбики погрешностей указывают на стандартное отклонение, а * указывает на p-значение менее 0,05 по сравнению с контролем только с водой.

Напротив, несмотря на наблюдаемое улучшение pLmV по сравнению с контролем, когда планарии подвергались воздействию комбинации экстракта семян гуараны и кофеина в более высоких концентрациях (0.1 мМ каждого; ) и комбинации экстракта гуараны и глюкозы (0,1 мМ экстракта семян гуараны и 5,61 мМ глюкозы; ) уже через две минуты мы не наблюдали значительной дополнительной стимуляции при использовании более высоких концентраций всех трех веществ (0,1 мМ для обоих семян гуараны). экстракт и кофеин, с 5,61 мМ глюкозы) после кратковременного двухминутного воздействия. Эти данные свидетельствуют о том, что краткосрочная польза достигается с гуараной, кофеином и глюкозой, но при комбинировании в более низких концентрациях.

Обсуждение

Энергетические напитки обычно содержат кофеин и сахар в качестве основных активных ингредиентов. Но многие популярные бренды также содержат смеси других веществ, которые якобы обеспечивают дополнительный стимул. Одной из таких все более распространенных добавок является гуарана. В этом исследовании мы задались вопросом, может ли гуарана оказывать дополнительный стимулирующий эффект по сравнению с одним только кофеином, используя анализ двигательной активности планарии (pLmV) [42, 43]. Сообщения, предполагающие, что кофеин не оказывает существенного влияния на активность планарии, поддержали наш выбор модельной системы, поскольку она позволила нам обнаружить тонизирующие эффекты компонентов семян гуараны отдельно от эффектов, обеспечиваемых кофеином [47, 50].В связи с тем, что кофеин обычно считается ответственным за стимулирующие свойства гуараны, мы использовали заявленное пятипроцентное содержание кофеина в семенах гуараны и типичный диапазон концентраций кофеина, указанный для большинства составов энергетических напитков, в качестве отправной точки для нашей работы. концентрации гуараны [19, 30, 55, 56].

При сравнении концентраций кофеина и гуараны на подвижность планарии действительно было очевидно, что кофеин не вызывал значительного увеличения pLmV ни при каких протестированных концентрациях, в то время как гуарана оказывала положительный эффект в диапазоне концентраций от 0.01 до 1,0 мМ (рис. и ). Примечательно, что средний относительный pLmV для каждой из концентраций кофеина выше 0,1 мМ после двухминутного привыкания, хотя и незначительно отличается от контроля с водой, имеет тенденцию к снижению и значительно выше 1,0 мМ, в том смысле, что p-значения между эти различные концентрации кофеина были менее 0,05 (+). Это контрастировало с результатами для одного только экстракта гуараны через две минуты, когда мы наблюдали пик стимуляции при использовании концентрации 0.1 мМ, но с сохранением значительного стимулирующего воздействия по сравнению с водными контролями даже при десятикратно более высокой концентрации (). Если бы мы выбрали менее консервативное содержание кофеина для нашего порошка семян гуараны, например, верхнюю оценку содержания кофеина в 10 процентов (удвоив нашу оценку), наша верхняя предельная концентрация 1,0 мМ была бы порядка 2,0 мМ кофеина и имела бы гораздо более высокий средний относительный pLmV по сравнению с одним кофеином. Таким образом, поскольку данные для кофеина и экстракта гуараны не соответствуют одному и тому же общему образцу активности, это также предполагает, что гуарана обеспечивает другое стимулирующее значение, отличное от кофеина.

Анализ данных pLmV, собранных после одночасового привыкания к одному кофеину, не выявил признаков стимуляции при любой тестируемой концентрации, что указывает на то, что даже тенденция к низкому уровню стимуляции, хотя и не значительно больше, чем контрольная вода, была короткой. -термин эффект (). В противоположность этому, данные, полученные через час после воздействия pLmV, подвергнутого воздействию экстракта семян гуараны, показали значительный стимул при 0,01 мМ, но не при 0,1 мМ (10). Эти результаты, полученные с помощью гуараны, показали, что более долгосрочный стимул может поддерживаться при более низких концентрациях, что является дополнительным доказательством в поддержку разницы между стимуляцией гуараной и кофеином.В целом, однако, мы предполагаем, что одночасовые данные как для кофеина, так и для гуараны указывают на то, что реакция типа толерантности возникает при длительном воздействии более высоких концентраций этих стимуляторов. Важно отметить, что другие исследователи заметили, что планарии лучше всего реагируют на стимуляторы в течение первых пяти минут воздействия, что также отражено в наших выводах [50].

Наши данные о двигательной активности, сочетающие выбранные низкие и высокие концентрации экстракта семян гуараны и кофеина (), показали, что гуарана обеспечивает дополнительную стимуляцию по сравнению с тем, что обеспечивается одним кофеином.Ни экстракт семян гуараны, ни кофеин сами по себе не обеспечивали заметного увеличения pLmV в качестве отдельного стимулятора при низкой исследованной концентрации (0,001 мМ, рис. и , соответственно), и это не изменилось при комбинировании веществ (). Но при комбинировании более высоких концентраций 0,1 мМ наблюдалось увеличение относительной средней подвижности после кратковременного двухминутного воздействия (2). Этот средний относительный pLmV был выше, чем тот, который наблюдался только для экстракта гуараны, что указывает на дополнительную кратковременную стимуляцию за счет комбинации более высоких концентраций гуараны и кофеина.Кроме того, поскольку такой аддитивный эффект не наблюдался при простом увеличении концентрации кофеина (), дополнительная стимуляция, обеспечиваемая экстрактом семян гуараны, может быть обеспечена каким-либо другим водорастворимым ингредиентом в семенах, который функционирует с использованием метаболического пути, отличного от используемого. кофеином. Примечательно, что другая группа, изучавшая влияние гуараны на мышей, также наблюдала увеличение активности, которое, вероятно, действовало с использованием механизма, отличного от механизма, используемого кофеином [20].Подтверждая нашу гипотезу о том, что гуарана обладает стимулирующими свойствами независимо от кофеина, этот подтверждающий результат также поддерживает использование планарии для исследований, связанных со стимулирующими эффектами в системах млекопитающих.

Предполагается, что стимулирующий эффект кофеина опосредуется рядом механизмов, включая внутриклеточную мобилизацию кальция, ингибирование фосфодиэстераз, связывание кофеина с бензодиазепиновыми рецепторами и антагонизм на уровне аденозиновых рецепторов [58, 59] .В то время как кофеин в гуаране, вероятно, работает по этим механизмам, другие компоненты, возможно, действуют по другим путям. Известно, что в дополнение к кофеину семена гуараны содержат ряд других возможных стимуляторов, таких как катахины, дубильные вещества и другие алкалоиды, такие как теофиллин и теобромин [19, 22, 30, 60]. В настоящее время имеется мало информации о преимуществах одного из этих ингредиентов перед другими.

Мы расширили нашу работу, чтобы рассмотреть влияние сахара на pLmV в сочетании с кофеином и нашим экстрактом семян гуараны.Конкретные сахара в разновидностях энергетических напитков различаются, поэтому в нашем исследовании мы решили работать с D-глюкозой или декстрозой. Не все производители энергетических напитков раскрывают полные концентрации сахаров в своих рецептурах, поэтому мы рассчитали среднюю концентрацию для использования в наших экспериментах. Мы получили это значение, усреднив количество сахара, указанное на нескольких контейнерах, которые давали некоторые сведения об общем количестве содержащихся в них сахаров. Мы сравнили это количество с оценками общего содержания сахара в энергетических напитках, обнаруженными в Интернете, которые были отражены в выбранной нами концентрации запасов [55, 57].Хотя мы наблюдали, что глюкоза сама по себе не вызывала очевидной стимуляции подвижности планарии (1), она действительно поддерживала стимуляцию гуараной при низких концентрациях в течение более длительного времени (12). Это особенно интересно тем, что ни одна глюкоза (1), ни экстракт семян гуараны (1) не приводили к увеличению pLmV после одночасового привыкания к этим концентрациям. Мы также наблюдали значительную кратковременную относительную среднюю стимуляцию при комбинировании высоких концентраций глюкозы и экстракта семян гуараны (), но поскольку только экстракт семян гуараны приводил к значительному увеличению pLmV () через тот же период времени, было невозможно определить, усилила ли глюкоза этот эффект, используя нашу систему.Но наши данные свидетельствуют о том, что при низких концентрациях глюкоза оказывает поддерживающее действие на стимуляцию гуараной в течение более длительных периодов времени. Эти данные согласуются с опубликованными сообщениями о том, что глюкоза может поддерживать эффект стимуляторов в модели планарии [48]. И наоборот, наши комбинации глюкозы и кофеина не приводили к увеличению подвижности планарии ни в один из исследованных моментов времени (2), что является дополнительным свидетельством стимулирующих свойств гуараны, которые действительно отличаются от свойств кофеина.

Совместное воздействие на планарий экстракта семян гуараны, кофеина и глюкозы привело к усилению подвижности планарий как после краткосрочной, так и при длительной стимуляции, но только при нашей комбинации с низкой концентрацией (). Однако, поскольку наша низкая концентрация экстракта семян гуараны в сочетании с низкой концентрацией глюкозы также обеспечивала устойчивую значительную стимуляцию после одночасовой инкубации, мы не можем сделать вывод, что кофеин оказывал дополнительный эффект в этой ситуации. С другой стороны, тройная комбинация была единственной протестированной, которая привела к увеличению pLmV уже после двух минут воздействия стимулятора.Примечательно, что эти данные свидетельствуют о том, что низкие концентрации гуараны, кофеина и глюкозы в сочетании достаточны для обеспечения краткосрочного стимула.

Мы повторяем, что, поскольку и кофеин, и глюкоза обеспечивают лишь низкий уровень стимуляции в модели планарии, мы смогли обнаружить возможность других стимулирующих веществ в экстракте семян гуараны и оценить, могут ли кофеин и глюкоза усиливать эти эффекты. Будущие исследования потребуются для определения фактического дополнительного стимулятора, содержащегося в гуаране [19].Но наше общее впечатление от этой работы состоит в том, что гуарана предлагает дополнительную стимуляцию по сравнению с кофеином, и что как кофеин, так и глюкоза могут изменить характер этой стимуляции. Очевидно, что для полной оценки того, как энергетические напитки влияют на физиологию, важно учитывать комбинацию содержащихся в них заместителей, поскольку эти вещества могут вести себя по-разному при смешивании вместе в одной и той же рецептуре. Действительно, другие также выдвинули идею изучения комбинаций компонентов энергетических напитков на человеческих моделях [9, 18, 25, 61], но, учитывая сложности контроля пищевых привычек человека, особенно когда речь идет о кофеине, мы предполагаем, что планарий system предлагает простой первый подход к изучению этих сложных взаимодействий.Также следует отметить, что наши наблюдения, сделанные при комбинировании экстракта семян гуараны, кофеина и глюкозы, показали краткосрочную пользу в низких концентрациях, противоречащую общему мнению, что «чем больше, тем лучше» в рецептурах энергетических напитков. Требуются дальнейшие исследования, но наши предварительные результаты с использованием модели планарии показывают, что более низкие дозы стимуляторов могут работать вместе, чтобы обеспечить краткосрочный стимулирующий эффект, и что сочетание большего количества этих ингредиентов может не дать долгосрочной пользы.

Гуарана обеспечивает дополнительную стимуляцию по сравнению с одним только кофеином в модели Planaria

Abstract

Стимулирующий эффект энергетических напитков в первую очередь объясняется содержащимся в них кофеином. Многие энергетические напитки также содержат другие ингредиенты, которые могут усилить тонизирующий эффект этих напитков с кофеином. Одной из таких добавок является гуарана. Гуарана — это вьющееся растение, произрастающее в бассейне Амазонки, в семенах которого содержится примерно в четыре раза больше кофеина, чем в кофейных зернах.Считается, что смесь других природных химических веществ, содержащихся в семенах гуараны, усиливает стимулирующее действие гуараны по сравнению с одним лишь кофеином. Тем не менее, несмотря на растущее использование гуараны в качестве добавки к энергетическим напиткам и растущий рынок ее в качестве пищевой добавки, наука, изучающая гуарану и то, как она влияет на другие пищевые ингредиенты, отсутствует. Чтобы оценить стимулирующие эффекты гуараны и других натуральных продуктов, необходима простая модель для исследования их физиологических свойств.Планария обеспечивает такую ​​систему. Было показано, что локомоторная активность и судорожная реакция планарий на воздействие вещества представляют собой превосходную систему для измерения эффектов стимуляции лекарствами, зависимости и отмены. Чтобы оценить стимулирующее действие гуараны, мы изучили, как она влияет на двигательную активность планарий вида Dugesia tigrina . Мы сообщаем о доказательствах того, что семена гуараны обеспечивают дополнительную стимуляцию по сравнению с одним только кофеином, и документируем изменения этой стимуляции в контексте как кофеина, так и глюкозы.

Введение

Кофеин считается основным стимулирующим компонентом энергетических напитков, в то время как сахара и другие вещества, такие как гуарана, таурин и женьшень, добавляются, часто в сочетании с витаминами, для приготовления различных смесей [1, 2]. Энергетические напитки стали признанным средством для повышения когнитивных способностей, памяти, бдительности, физической работоспособности и сердечно-сосудистой деятельности [3–10]. Но хотя потребление энергетических напитков продолжает расти, высказываются опасения по поводу высокого содержания в них кофеина, а вместе с этим и рисков, связанных с их потреблением, особенно молодыми людьми [1, 8, 11–15].Использование гуараны и других материалов на растительной основе может еще больше увеличить содержание кофеина и общие стимулирующие свойства этих напитков, но, поскольку они считаются растительными добавками, на эти добавки на растительной основе не распространяются те же требования к отчетности, что и на сахар и кофеин. Следовательно, концентрация этих добавок, не говоря уже о том, что они могут содержать, обычно не указывается в рецептурах энергетических напитков. Это непонимание ставит под вопрос, как комбинация полученных ингредиентов может работать вместе, чтобы повлиять на здоровье тех, кто потребляет содержащие их продукты [2, 12–14, 16–18].

Гуарана ( Paullinia cupana ) — вид вьющегося растения, произрастающего в Амазонии, который известен как антиоксидант, традиционное лекарственное средство и эффективный стимулятор [19–25]. В недавней работе также изучалось использование гуараны для борьбы с усталостью и депрессией, связанными с лечением рака [26–28]. Основным компонентом гуараны, которому приписывают эти полезные свойства, является кофеин, который, в зависимости от способа приготовления экстракта, может более чем в четыре раза превышать количество, содержащееся в кофейных зернах [19, 29].Кроме того, считается, что другие компоненты семян гуараны обладают дополнительным стимулирующим эффектом по сравнению с одним только кофеином [19–23, 30]. Таким образом, растительные продукты, такие как гуарана, являются привлекательной добавкой для производителей многих популярных составов энергетических напитков, несмотря на отсутствие исследований, посвященных ассоциативным свойствам растительных экстрактов с другими пищевыми добавками, лекарствами и стимуляторами [29].

Чтобы оценить роль гуараны как стимулятора по сравнению с одним только кофеином, мы разработали простую, легко управляемую систему, используя планарию Dugesia tigrina , свободноживущего водного плоского червя, в качестве модельного организма.Планарий чаще всего используют в исследованиях, направленных на регенерацию и восстановление тканей, благодаря их исключительной регенеративной способности [31]. Планарии также хорошо подходят для изучения стимуляторов, потому что они обладают базовой билатеральной симметрией и соответствующей центральной нервной системой, которая использует системы нейротрансмиттеров, сравнимые с обнаруженными у млекопитающих [32-39]. Планарии предпочитают темноту и используют фоторецепторы, чтобы обнаруживать свет и реагировать на него. Таким образом, планарии способны обучаться в лабиринтах и ​​могут вырабатывать условный ответ на свет, который может быть реализован в поведенческих исследованиях, в том числе при модификации лекарств [40, 41].Анализы подвижности планарии также были разработаны для исследований зависимости от психоактивных веществ и отмены [42–53]. Поскольку анализ подвижности планарии предлагает простую, легко контролируемую систему для мониторинга воздействия раздражителей, мы приняли этот анализ для использования в нашем исследовании гуараны. Предыдущие исследования также показали, что кофеин не вызывает значительного увеличения активности планарии [47, 50]. Это наблюдение послужило дополнительным стимулом для использования планарии в нашей работе, поскольку оно дает благоприятный фон для изучения тонизирующих эффектов гуараны отдельно от эффектов кофеина.

Наблюдая за изменениями в подвижности планарии при воздействии гуараны, кофеина и глюкозы, мы определили, что семена гуараны содержат дополнительный стимулятор по сравнению с одним только кофеином, и что глюкоза может поддерживать эти тонизирующие эффекты. Мы также предоставляем доказательства того, что гуарана дает краткосрочную дополнительную пользу в сочетании с кофеином. Наши данные также свидетельствуют о том, что комбинация гуараны, кофеина и глюкозы обеспечивает кратковременный стимул при низких концентрациях.

Материалы и методы

Разведение планарий

Планарий ( Dugesia tigrina ) были приобретены у компании Carolina Biological Supply Company (132954; Берлингтон, Северная Каролина).Этот вид также упоминается как Girardia tigrina [54]. Запасы содержали в темноте с использованием родниковой воды (Poland Spring), в которую часто добавляли 0,5 мМ NaHCO 3 . Для хранения образцов использовались пластиковые контейнеры для хранения пищевых продуктов с приоткрытыми крышками. Планариям давали возможность акклиматизироваться за одну неделю до кормления или экспериментов. В качестве пищи использовались органические яйца, сваренные вкрутую. Дважды в неделю небольшое количество яичного белка и желтка измельчали ​​и помещали в контейнеры.Планарии кормили ad libidum в течение одного-двух часов. Затем планарий переносили в свежие контейнеры и родниковую воду (Poland Spring). Культуральную воду меняли на следующий день, чтобы удалить мусор и сохранить воду свежей.

Тест скорости движения планарии (pLmV)

Тест скорости движения планарии (pLmV), установленный R.B. Raffa и S.M. Rawls был адаптирован для этого исследования [42, 43]. Вкратце, планарий приучали к соответствующему тестируемому веществу или комбинации в соответствующей концентрации либо в течение двух минут, либо в течение одного часа.Затем червей переносили в центр чашки Петри диаметром 10 см, помещенной на бумагу с сеткой, с линиями на расстоянии 0,5 см друг от друга, содержащей 20 мл того же испытуемого раствора. Подвижность планарии контролировали в течение 3 минут, оценивая количество пересеченных линий сетки. Испытываемые концентрации считались слишком высокими, если черви демонстрировали скручивание или судорожное поведение в течение периода привыкания. Каждое экспериментальное состояние тестировали не менее трех раз, и каждое испытание обычно проводили трижды, если не больше, так что окончательные данные pLmV оценивали с использованием по меньшей мере девяти червей для каждого условия.Для каждого теста исходные растворы экстракта гуараны, кофеина или глюкозы разводили в родниковой воде. Были предприняты меры для проведения тестов в разное время дня, чтобы учесть различные уровни зарождающейся или циркадной активности. Каждый набор тестов проводили два или три разных опытных экспериментатора. Не обнаружено заметного изменения качества воды, такого как pH, в результате применения исследуемых веществ в исследованных концентрациях. Каждый червь, включая контрольные экземпляры, использовался только один раз.

Стандартные растворы

Все растворы были приготовлены с использованием дистиллированной воды.Кофеин был приобретен у Sigma Aldrich (C7731; Сент-Луис, Миссури) и был приготовлен в виде исходного раствора с концентрацией 10 мМ или 1 мМ. D-глюкозу или декстрозу также получали от Sigma Aldrich (D9434; Сент-Луис, Миссури) в виде исходного раствора с концентрацией 561 мМ. Гуарана, использованная для этого исследования, была приобретена в Интернете в магазине Grass Hut Treasures (порошок цельных семян гуараны; www.grasshuttreasures.com/guarana/guaranapowder.html). Запасы гуараны были приготовлены на основе заявленного пятипроцентного содержания кофеина [19, 30]. Для приготовления 10 мМ и 1 мМ экстракта гуараны соответствующую массу порошка семян гуараны помещали в раствор, перемешивали в течение нескольких часов, а затем дважды фильтровали для удаления нерастворимого материала.Полученные экстракты гуараны охлаждали и хранили в бутылках, обернутых фольгой, чтобы защитить их от света.

Статистика

Все данные были нормализованы к соответствующим контролям и выражены как среднее +/- стандартное отклонение. Каждая точка данных была проанализирована с использованием двустороннего парного Т-критерия Стьюдента и считалась значимой, если соответствующее значение р было меньше 0,05.

Результаты

Гуарана обеспечивает дополнительную кратковременную стимуляцию по сравнению с одним только кофеином

Фактическая концентрация гуараны, присутствующей в энергетических напитках, обычно не сообщается, но кофеин считается основным стимулятором, присутствующим в семенах [19].Поэтому для приготовления растворов гуараны мы руководствовались опубликованными анализами содержания кофеина в семенах гуараны. Оцененное содержание кофеина в бобах гуараны варьировалось в зависимости от приготовления и метода анализа — от одного до двенадцати процентов — но обычно сообщалось, что оно составляет около пяти процентов [19, 24, 30]. Затем мы исследовали содержание кофеина в энергетических напитках, просматривая информацию, представленную на упаковках, и используя фиг. доступны на интернет-ресурсах. Эта информация использовалась для установления границ концентрации для наших тестов со стимуляторами [55, 56].Эти источники указывают на типичные концентрации кофеина в диапазоне от примерно 0,4 мМ до чуть более 2 мМ, поэтому мы выбрали диапазон концентраций, который соответствовал бы им и позволял нам свободно изучать комбинации как очищенного кофеина, так и гуараны, сохраняя при этом реалистичные концентрации кофеина. Выбранный диапазон охватывал от 0,001 до 10 мМ.

Тест скорости передвижения планарии (pLmV) был адаптирован для оценки стимулирующих свойств гуараны [42, 43]. Мы начали с тестирования набора концентраций, включая 0.001, 0,003, 0,01, 0,03, 0,1, 0,3, 1,0, 3,0 и 10 мМ и наблюдение за подвижностью планарии после двухминутного периода инкубации в экстракте семян гуараны (). Из протестированных концентраций наиболее эффективная стимуляция происходила выше 0,003 мМ, при этом значительная стимуляция происходила при 0,01 мМ (р = 0,02), 0,1 мМ (р = 0,008) и 1,0 мМ (р = 0,006). Экстракт семян гуараны в концентрации 10 мМ подавлял подвижность планарии (10) и вызывал многократное скручивание червей во время теста. Чтобы определить, обеспечит ли более длительное воздействие гуараны дополнительную стимуляцию или позволит более низким концентрациям воздействовать, мы наблюдали подвижность планарии через один час в 0.001, 0,003, 0,01, 0,03 и 0,1 мМ экстракта семян гуараны (). Как и при двухминутном воздействии, через час не наблюдалось значительной стимуляции подвижности планарий при 0,001 и 0,003 мМ. Мы по-прежнему наблюдали значительное увеличение активности при 0,01 мМ (p = 0,009), но эффект был потерян при 0,1 мМ.

Скорость движения планарии (pLmV) увеличивается в ответ на прием только гуараны.

Показаны выбранные данные pLmV относительно контролей, получавших только воду, для Dugesia tigrina , подвергшихся воздействию различных концентраций экстракта гуараны.Планарий приучали к соответствующим условиям либо в течение 2 минут (а), либо в течение 1 часа (б) до того, как отслеживали их активность pLmV. Подвижность планарии контролировали после того, как червей помещали в чашку Петри, содержащую соответствующую концентрацию экстракта семян гуараны, после тестируемого периода привыкания. Чашки Петри помещали на миллиметровую бумагу и в течение трех минут следили за количеством пересеченных линий сетки. Белая полоса представляет собой нормализованное контрольное значение pLmV, а черные столбцы указывают относительные значения pLmV для контрольного теста.Столбики погрешностей указывают на стандартное отклонение, а * указывает на p-значение менее 0,05 по сравнению с контролем только с водой.

В связи с тем, что наши результаты показали, что гуарана обеспечивает значительно большую стимуляцию подвижности планарий, мы продолжили тестировать влияние очищенного кофеина на pLmV. Поскольку другие исследователи определили, что кофеин не обеспечивает значительной стимуляции подвижности планарии, мы стремились использовать систему, чтобы оценить, обеспечивает ли гуарана дополнительный стимул по сравнению с одним кофеином [47, 50].Однако было необходимо определить, обеспечивают ли наша система и выбор видов планарий сопоставимый фон с этими опубликованными отчетами. Опять же, мы начали с тестирования подвижности планарии, используя диапазон концентраций кофеина (0,001, 0,003, 0,01, 0,03, 0,1, 0,3, 1,0, 3,0 и 10 мМ) после двухминутного периода воздействия (). Хотя подвижность планарии была немного повышена при концентрациях от 0,003 мМ до 3,0 мМ, мы не наблюдали какого-либо значительного увеличения общей активности планарии по сравнению с контрольной группой, получавшей только воду.Однако, поскольку рассчитанное p-значение для pLmV с использованием 0,001 мМ кофеина составило 0,05, что предполагает пограничную значимость, мы проверили, будут ли даже более низкие концентрации кофеина вызывать значительный пик активности. С этой целью мы исследовали эффект как 0,0001, так и 0,0003 мМ кофеина, но по-прежнему не наблюдали какого-либо значительного увеличения стимуляции по сравнению с контролем без кофеина (не показано). Как и в случае с экстрактом гуараны, 10 мМ кофеина подавляли подвижность планарии (1) и приводили к устойчивым сокращениям в течение периода анализа.Эти результаты сравнивали с временем инкубации в один час (1). Как и в случае с экстрактом гуараны, мы исследовали 0,001, 0,003, 0,01, 0,03 и 0,1 мМ, но опять же, кофеин сам по себе не вызывал существенного повышения pLmV. Эти результаты подтвердили, что очищенный кофеин обеспечивает заметную, хотя и незначительную стимуляцию движения планарии в испытанных концентрациях.

Кофеин сам по себе не способствует значительному увеличению скорости движения планарии (pLmV).

Показаны выбранные данные pLmV относительно контролей, получавших только воду, для Dugesia tigrina , подвергшихся воздействию различных концентраций кофеина.Планарий приучали к соответствующим условиям либо в течение 2 минут (а), либо в течение 1 часа (б) до того, как отслеживали их активность pLmV. Подвижность планарии контролировали после того, как червей помещали в чашку Петри, содержащую соответствующую концентрацию кофеина, после тестируемого периода привыкания. Чашки Петри помещали на миллиметровую бумагу и в течение трех минут следили за количеством пересеченных линий сетки. Белая полоса представляет собой нормализованное контрольное значение pLmV, а черные столбцы указывают относительные значения pLmV для контрольного теста.Столбики погрешностей указывают на стандартное отклонение, а * указывает на p-значение менее 0,05 по сравнению с контролем только с водой.

Чтобы определить, можно ли добиться дополнительного стимулирующего эффекта за счет сочетания кофеина и гуараны, мы использовали растворы, содержащие как низкие, так и высокие концентрации кофеина и экстракта семян гуараны, и оценивали активность планарии после экспозиции в течение двух минут или одного часа ( ). Поскольку экстракт семян гуараны в концентрации 0,1 мМ обеспечивает самый высокий средний относительный pLmV в тестируемом диапазоне концентраций, мы выбрали эту концентрацию для нашей высококачественной комбинации с кофеином.Концентрация кофеина 0,1 мМ также обеспечивала наибольшую среднюю относительную стимуляцию (рассчитанную как 1,21) на верхнем пределе по сравнению с контролем только с водой, несмотря на то, что она была меньше, чем пиковая концентрация 0,001 мМ, выбранная для комбинаций нижнего предела, которая имела средний относительный pLmV 1,26 (+). Комбинация 0,001 мМ кофеина и экстракта семян гуараны не привела к значительному повышению показателей pLmV ни через две минуты, ни через час. Однако, используя более высокую концентрацию 0,1 мМ для обоих растворов, мы наблюдали увеличение скорости движения через две минуты, но не через один час ().Среднее относительное значение pLmV при использовании комбинированного раствора после двухминутного воздействия было несколько выше, чем при использовании только экстракта гуараны, 1,55 () против 1,44 () соответственно. Эти два набора данных значительно отличались друг от друга с p-значением 0,006. Наши результаты показали, что гуарана обеспечивает дополнительный уровень стимуляции по сравнению с кофеином.

Гуарана поддерживает дополнительную кратковременную стимуляцию скорости движения планарии (pLmV) по сравнению с одним только кофеином.

Показаны данные pLmV относительно контролей, получавших только воду, для Dugesia tigrina , подвергшихся воздействию комбинации 0,001 мМ экстракта семян гуараны и 0,001 мМ кофеина (серые столбцы) или 0,1 мМ экстракта гуараны и 0,001 мМ кофеина (черные столбцы). Планарий приучали к соответствующим условиям либо в течение 2 минут, либо в течение 1 часа, как указано, до того, как отслеживали их активность pLmV. Подвижность планарии контролировали после того, как червей помещали в чашку Петри, содержащую соответствующие концентрации экстракта семян гуараны и кофеина, после тестируемого периода привыкания.Чашки Петри помещали на миллиметровую бумагу и в течение трех минут следили за количеством пересеченных линий сетки. Белая полоса представляет собой нормализованное контрольное значение pLmV, а черные столбцы указывают относительные значения pLmV для контрольного теста. Столбики погрешностей указывают на стандартное отклонение, а * указывает на p-значение менее 0,05 по сравнению с контролем только с водой.

Низкие концентрации глюкозы поддерживают долгосрочную стимуляцию гуараной

Поскольку сахар также является основным ингредиентом большинства энергетических напитков, мы далее оценили, как глюкоза влияет на стимуляцию гуараной и кофеином.Для начала мы определили, сколько сахара содержится в этих напитках, изучив список ингредиентов на упаковках. Часто содержание сахара не сообщалось полностью или просто указывалось как «сахар», без предоставления подробной информации о том, какой именно сахар учитывался. Кроме того, если был указан тип сахара, часто сообщалось о разных количествах для каждого из них — сахарозы, фруктозы и глюкозы. Также было обнаружено, что «специальные смеси» содержат дополнительный сахар без раскрытия концентрации. Мы также оценивали диапазоны концентраций с помощью онлайн-ресурсов [55, 57].Мы решили использовать глюкозу в качестве стандарта сахара, потому что это наиболее легко метаболизируемый сахар, и определили, что концентрация сахара колеблется от 290 до 730 мМ. Затем мы рассчитали среднюю концентрацию сахара, указанную на упаковках с напитками, как 561 мМ, которую мы приняли за глюкозу. Мы использовали этот рисунок для приготовления нашего стандартного маточного раствора. Как и в случае с гуараной и кофеином, мы провели исследование pLmV, используя только глюкозу после экспозиции в течение двух минут и одного часа (2). Концентрация 561 мМ оказалась ингибирующей передвижение планарии, что определялось повторяющимся поведением скручивания, и поэтому мы провели наши эксперименты с серией концентраций глюкозы ниже этого значения (0.561, 1,683, 5,61, 16,83, 56,1, 168,3 и 561 мМ). Мы не обнаружили какого-либо значительного увеличения pLmV при использовании любой из этих концентраций после двухминутного или одночасового периода воздействия. Однако мы обнаружили пик средней относительной стимуляции 1,22 при 5,61 мМ после двухминутного привыкания. Это значительно отличалось от среднего относительного pLmV 0,92 при 0,561 мМ с p-значением p = 6,0×10 -6 (). Напротив, средние относительные двигательные скорости для концентраций глюкозы, протестированные после одночасового воздействия глюкозы (), не привели к каким-либо заметным пикам стимуляции выше контроля с водой, несмотря на значительную разницу между 0.561 и 5,61 мМ (средний относительный pLmV 1,15 и 1,17 соответственно; p = 0,011).

Глюкоза сама по себе не способствует значительному увеличению двигательной скорости планарии (pLmV).

Показаны выбранные данные pLmV относительно контролей, получавших только воду, для Dugesia tigrina , подвергшихся воздействию различных концентраций глюкозы. Планарий приучали к соответствующим условиям либо в течение 2 минут (а), либо в течение 1 часа (б) до того, как отслеживали их активность pLmV. Подвижность планарии контролировали после помещения червей в чашку Петри, содержащую соответствующую концентрацию глюкозы, после тестируемого периода привыкания.Чашки Петри помещали на миллиметровую бумагу и в течение трех минут следили за количеством пересеченных линий сетки. Белая полоса представляет собой нормализованное контрольное значение pLmV, а черные столбцы указывают относительные значения pLmV для контрольного теста. Столбики погрешностей указывают на стандартное отклонение, а * указывает на p-значение менее 0,05 по сравнению с контролем только с водой.

Затем мы оценили, как комбинация гуараны с глюкозой влияет на pLmV, используя низкие и высокие концентрации после двухминутного и одночасового воздействия ().На нижнем уровне, при концентрации 0,001 мМ экстракта гуараны, дополненного 0,561 мМ глюкозы, мы наблюдали значительное увеличение подвижности через один час (p = 1,5×10 -4 ). Важно отметить, что ни экстракт гуараны, ни глюкоза сами по себе не оказывали значительной стимуляции в этот момент времени при 0,001 мМ или 0,561 мМ соответственно. Это говорит о том, что при низких концентрациях глюкоза оказывает поддерживающее действие на стимуляцию гуараной в течение более длительного периода времени. Напротив, этот эффект не был очевиден при использовании комбинированной высококонцентрированной концентрации, состоящей из 0.1 мМ гуараны и 5,61 мМ глюкозы, что на самом деле слегка подавляло подвижность планарии в среднем после одночасового периода воздействия. Вместо этого высокие данные о концентрации привели к значительной стимуляции через две минуты (p = 0,032). Примечательно, что гуарана действительно обеспечивала стимуляцию в качестве отдельного реагента через две минуты при концентрации 0,1 мМ со средним относительным pLmV 1,44 по сравнению с контролем с водой (), а с глюкозой это значение фактически снизилось до pLmV 1,24 по сравнению с контролем ( ).Статистический анализ показал, что двухминутные однократные данные гуараны при 0,1 мМ и комбинированные данные высокой концентрации с использованием экстракта гуараны и глюкозы значительно отличались друг от друга (p = 1,0×10 -7 ).

Глюкоза поддерживает стимуляцию гуараной двигательной скорости планарии (pLmV).

Показаны данные pLmV относительно контролей, получавших только воду, для Dugesia tigrina , подвергшихся воздействию комбинации 0,001 мМ экстракта семян гуараны и 0,561 мМ глюкозы (серые столбцы), или 0.Экстракт семян гуараны 1 мМ и глюкоза 5,61 мМ (черные столбцы). Планарий приучали к соответствующим условиям либо в течение 2 минут, либо в течение 1 часа, как указано, до того, как отслеживали их активность pLmV. Подвижность планарии контролировали после того, как червей помещали в чашку Петри, содержащую соответствующие концентрации экстракта гуараны и глюкозы, после тестируемого периода привыкания. Чашки Петри помещали на миллиметровую бумагу и в течение трех минут следили за количеством пересеченных линий сетки.Белая полоса представляет собой нормализованное контрольное значение pLmV, а черные столбцы указывают относительные значения pLmV для контрольного теста. Столбики погрешностей указывают на стандартное отклонение, а * указывает на p-значение менее 0,05 по сравнению с контролем только с водой.

Напротив, после дополнительной оценки кофеина и глюкозы () мы не наблюдали увеличения скорости движения планарии ни при низких, ни при высоких концентрациях в течение инкубационного периода продолжительностью две минуты и один час.Эти результаты еще раз подчеркнули потенциальную разницу между гуараной и кофеином в том, что реакция на глюкозу была разной между двумя стимуляторами.

Глюкоза не усиливает действие кофеина на скорость движения планарии (pLmV).

Показаны данные pLmV относительно контролей, получавших только воду, для Dugesia tigrina , подвергшихся воздействию комбинации 0,001 мМ кофеина и 0,561 мМ глюкозы (серые столбцы) или 0,1 мМ кофеина и 5,61 мМ глюкозы (черные столбцы). Планарий приучали к соответствующим условиям либо в течение 2 минут, либо в течение 1 часа, как указано, до того, как отслеживали их активность pLmV.Подвижность планарии контролировали после того, как червей помещали в чашку Петри, содержащую соответствующие концентрации кофеина и глюкозы, после тестируемого периода привыкания. Чашки Петри помещали на миллиметровую бумагу и в течение трех минут следили за количеством пересеченных линий сетки. Белая полоса представляет собой нормализованное контрольное значение pLmV, а черные столбцы указывают относительные значения pLmV для контрольного теста. Столбики погрешностей указывают на стандартное отклонение, а * указывает на p-значение меньше 0.05 по сравнению с контролем только на воде.

Гуарана в сочетании с глюкозой и кофеином обеспечивает краткосрочный стимул при низких концентрациях

При оценке скорости движения с использованием экстракта семян гуараны вместе с кофеином и глюкозой () каждая гуарана и кофеин с 0,561 мМ глюкозы) всего через две минуты привыкания (p = 0,041). Важно отметить, что мы не обнаружили стимуляции низкой концентрации через две минуты с двойными комбинациями экстракта семян гуараны и кофеина, экстракта семян гуараны и глюкозы или кофеина и глюкозы (рис. 1 и 2 соответственно).Это говорит о том, что некоторое стимулирующее действие может быть достигнуто за счет комбинации всех трех веществ, которое могло бы не проявляться иначе при более низких концентрациях любого из трех веществ по отдельности или в паре в течение короткого времени. Значимый стимул низкой концентрации сохранялся в течение одного часа, хотя и на более низком уровне, со средним относительным значением стимуляции 1,21 по сравнению с 1,36, которое наблюдалось через две минуты (p = 0,016). Но мы также наблюдали средний относительный стимул низкой концентрации с экстрактом гуараны при 0.0,001 мМ в сочетании с 0,561 мМ глюкозы при 1,31 (1,31) в час, что было больше, чем при добавлении кофеина в тройную комбинацию, что свидетельствует о том, что кофеин может не способствовать одночасовой тройной комбинированной стимуляции pLmV при низкие концентрации.

Гуарана с глюкозой и кофеином поддерживает двигательную скорость планарии (pLmV) при низких концентрациях.

Показаны данные pLmV относительно контролей, получавших только воду, для Dugesia tigrina , подвергшихся воздействию комбинации 0.0,001 мМ экстракта семян гуараны, 0,001 мМ кофеина и 0,561 мМ глюкозы (серые столбцы) или 0,1 мМ экстракта семян гуараны, 0,1 мМ кофеина и 5,61 мМ глюкозы (черные столбцы). Планарий приучали к соответствующим условиям либо в течение 2 минут, либо в течение 1 часа, как указано, до того, как отслеживали их активность pLmV. Подвижность планарии контролировали после того, как червей помещали в чашку Петри, содержащую соответствующие концентрации экстракта гуараны, кофеина и глюкозы, после тестируемого периода привыкания.Чашки Петри помещали на миллиметровую бумагу и в течение трех минут следили за количеством пересеченных линий сетки. Белая полоса представляет собой нормализованное контрольное значение pLmV, а черные столбцы указывают относительные значения pLmV для контрольного теста. Столбики погрешностей указывают на стандартное отклонение, а * указывает на p-значение менее 0,05 по сравнению с контролем только с водой.

Напротив, несмотря на наблюдаемое улучшение pLmV по сравнению с контролем, когда планарии подвергались воздействию комбинации экстракта семян гуараны и кофеина в более высоких концентрациях (0.1 мМ каждого; ) и комбинации экстракта гуараны и глюкозы (0,1 мМ экстракта семян гуараны и 5,61 мМ глюкозы; ) уже через две минуты мы не наблюдали значительной дополнительной стимуляции при использовании более высоких концентраций всех трех веществ (0,1 мМ для обоих семян гуараны). экстракт и кофеин, с 5,61 мМ глюкозы) после кратковременного двухминутного воздействия. Эти данные свидетельствуют о том, что краткосрочная польза достигается с гуараной, кофеином и глюкозой, но при комбинировании в более низких концентрациях.

Обсуждение

Энергетические напитки обычно содержат кофеин и сахар в качестве основных активных ингредиентов. Но многие популярные бренды также содержат смеси других веществ, которые якобы обеспечивают дополнительный стимул. Одной из таких все более распространенных добавок является гуарана. В этом исследовании мы задались вопросом, может ли гуарана оказывать дополнительный стимулирующий эффект по сравнению с одним только кофеином, используя анализ двигательной активности планарии (pLmV) [42, 43]. Сообщения, предполагающие, что кофеин не оказывает существенного влияния на активность планарии, поддержали наш выбор модельной системы, поскольку она позволила нам обнаружить тонизирующие эффекты компонентов семян гуараны отдельно от эффектов, обеспечиваемых кофеином [47, 50].В связи с тем, что кофеин обычно считается ответственным за стимулирующие свойства гуараны, мы использовали заявленное пятипроцентное содержание кофеина в семенах гуараны и типичный диапазон концентраций кофеина, указанный для большинства составов энергетических напитков, в качестве отправной точки для нашей работы. концентрации гуараны [19, 30, 55, 56].

При сравнении концентраций кофеина и гуараны на подвижность планарии действительно было очевидно, что кофеин не вызывал значительного увеличения pLmV ни при каких протестированных концентрациях, в то время как гуарана оказывала положительный эффект в диапазоне концентраций от 0.01 до 1,0 мМ (рис. и ). Примечательно, что средний относительный pLmV для каждой из концентраций кофеина выше 0,1 мМ после двухминутного привыкания, хотя и незначительно отличается от контроля с водой, имеет тенденцию к снижению и значительно выше 1,0 мМ, в том смысле, что p-значения между эти различные концентрации кофеина были менее 0,05 (+). Это контрастировало с результатами для одного только экстракта гуараны через две минуты, когда мы наблюдали пик стимуляции при использовании концентрации 0.1 мМ, но с сохранением значительного стимулирующего воздействия по сравнению с водными контролями даже при десятикратно более высокой концентрации (). Если бы мы выбрали менее консервативное содержание кофеина для нашего порошка семян гуараны, например, верхнюю оценку содержания кофеина в 10 процентов (удвоив нашу оценку), наша верхняя предельная концентрация 1,0 мМ была бы порядка 2,0 мМ кофеина и имела бы гораздо более высокий средний относительный pLmV по сравнению с одним кофеином. Таким образом, поскольку данные для кофеина и экстракта гуараны не соответствуют одному и тому же общему образцу активности, это также предполагает, что гуарана обеспечивает другое стимулирующее значение, отличное от кофеина.

Анализ данных pLmV, собранных после одночасового привыкания к одному кофеину, не выявил признаков стимуляции при любой тестируемой концентрации, что указывает на то, что даже тенденция к низкому уровню стимуляции, хотя и не значительно больше, чем контрольная вода, была короткой. -термин эффект (). В противоположность этому, данные, полученные через час после воздействия pLmV, подвергнутого воздействию экстракта семян гуараны, показали значительный стимул при 0,01 мМ, но не при 0,1 мМ (10). Эти результаты, полученные с помощью гуараны, показали, что более долгосрочный стимул может поддерживаться при более низких концентрациях, что является дополнительным доказательством в поддержку разницы между стимуляцией гуараной и кофеином.В целом, однако, мы предполагаем, что одночасовые данные как для кофеина, так и для гуараны указывают на то, что реакция типа толерантности возникает при длительном воздействии более высоких концентраций этих стимуляторов. Важно отметить, что другие исследователи заметили, что планарии лучше всего реагируют на стимуляторы в течение первых пяти минут воздействия, что также отражено в наших выводах [50].

Наши данные о двигательной активности, сочетающие выбранные низкие и высокие концентрации экстракта семян гуараны и кофеина (), показали, что гуарана обеспечивает дополнительную стимуляцию по сравнению с тем, что обеспечивается одним кофеином.Ни экстракт семян гуараны, ни кофеин сами по себе не обеспечивали заметного увеличения pLmV в качестве отдельного стимулятора при низкой исследованной концентрации (0,001 мМ, рис. и , соответственно), и это не изменилось при комбинировании веществ (). Но при комбинировании более высоких концентраций 0,1 мМ наблюдалось увеличение относительной средней подвижности после кратковременного двухминутного воздействия (2). Этот средний относительный pLmV был выше, чем тот, который наблюдался только для экстракта гуараны, что указывает на дополнительную кратковременную стимуляцию за счет комбинации более высоких концентраций гуараны и кофеина.Кроме того, поскольку такой аддитивный эффект не наблюдался при простом увеличении концентрации кофеина (), дополнительная стимуляция, обеспечиваемая экстрактом семян гуараны, может быть обеспечена каким-либо другим водорастворимым ингредиентом в семенах, который функционирует с использованием метаболического пути, отличного от используемого. кофеином. Примечательно, что другая группа, изучавшая влияние гуараны на мышей, также наблюдала увеличение активности, которое, вероятно, действовало с использованием механизма, отличного от механизма, используемого кофеином [20].Подтверждая нашу гипотезу о том, что гуарана обладает стимулирующими свойствами независимо от кофеина, этот подтверждающий результат также поддерживает использование планарии для исследований, связанных со стимулирующими эффектами в системах млекопитающих.

Предполагается, что стимулирующий эффект кофеина опосредуется рядом механизмов, включая внутриклеточную мобилизацию кальция, ингибирование фосфодиэстераз, связывание кофеина с бензодиазепиновыми рецепторами и антагонизм на уровне аденозиновых рецепторов [58, 59] .В то время как кофеин в гуаране, вероятно, работает по этим механизмам, другие компоненты, возможно, действуют по другим путям. Известно, что в дополнение к кофеину семена гуараны содержат ряд других возможных стимуляторов, таких как катахины, дубильные вещества и другие алкалоиды, такие как теофиллин и теобромин [19, 22, 30, 60]. В настоящее время имеется мало информации о преимуществах одного из этих ингредиентов перед другими.

Мы расширили нашу работу, чтобы рассмотреть влияние сахара на pLmV в сочетании с кофеином и нашим экстрактом семян гуараны.Конкретные сахара в разновидностях энергетических напитков различаются, поэтому в нашем исследовании мы решили работать с D-глюкозой или декстрозой. Не все производители энергетических напитков раскрывают полные концентрации сахаров в своих рецептурах, поэтому мы рассчитали среднюю концентрацию для использования в наших экспериментах. Мы получили это значение, усреднив количество сахара, указанное на нескольких контейнерах, которые давали некоторые сведения об общем количестве содержащихся в них сахаров. Мы сравнили это количество с оценками общего содержания сахара в энергетических напитках, обнаруженными в Интернете, которые были отражены в выбранной нами концентрации запасов [55, 57].Хотя мы наблюдали, что глюкоза сама по себе не вызывала очевидной стимуляции подвижности планарии (1), она действительно поддерживала стимуляцию гуараной при низких концентрациях в течение более длительного времени (12). Это особенно интересно тем, что ни одна глюкоза (1), ни экстракт семян гуараны (1) не приводили к увеличению pLmV после одночасового привыкания к этим концентрациям. Мы также наблюдали значительную кратковременную относительную среднюю стимуляцию при комбинировании высоких концентраций глюкозы и экстракта семян гуараны (), но поскольку только экстракт семян гуараны приводил к значительному увеличению pLmV () через тот же период времени, было невозможно определить, усилила ли глюкоза этот эффект, используя нашу систему.Но наши данные свидетельствуют о том, что при низких концентрациях глюкоза оказывает поддерживающее действие на стимуляцию гуараной в течение более длительных периодов времени. Эти данные согласуются с опубликованными сообщениями о том, что глюкоза может поддерживать эффект стимуляторов в модели планарии [48]. И наоборот, наши комбинации глюкозы и кофеина не приводили к увеличению подвижности планарии ни в один из исследованных моментов времени (2), что является дополнительным свидетельством стимулирующих свойств гуараны, которые действительно отличаются от свойств кофеина.

Совместное воздействие на планарий экстракта семян гуараны, кофеина и глюкозы привело к усилению подвижности планарий как после краткосрочной, так и при длительной стимуляции, но только при нашей комбинации с низкой концентрацией (). Однако, поскольку наша низкая концентрация экстракта семян гуараны в сочетании с низкой концентрацией глюкозы также обеспечивала устойчивую значительную стимуляцию после одночасовой инкубации, мы не можем сделать вывод, что кофеин оказывал дополнительный эффект в этой ситуации. С другой стороны, тройная комбинация была единственной протестированной, которая привела к увеличению pLmV уже после двух минут воздействия стимулятора.Примечательно, что эти данные свидетельствуют о том, что низкие концентрации гуараны, кофеина и глюкозы в сочетании достаточны для обеспечения краткосрочного стимула.

Мы повторяем, что, поскольку и кофеин, и глюкоза обеспечивают лишь низкий уровень стимуляции в модели планарии, мы смогли обнаружить возможность других стимулирующих веществ в экстракте семян гуараны и оценить, могут ли кофеин и глюкоза усиливать эти эффекты. Будущие исследования потребуются для определения фактического дополнительного стимулятора, содержащегося в гуаране [19].Но наше общее впечатление от этой работы состоит в том, что гуарана предлагает дополнительную стимуляцию по сравнению с кофеином, и что как кофеин, так и глюкоза могут изменить характер этой стимуляции. Очевидно, что для полной оценки того, как энергетические напитки влияют на физиологию, важно учитывать комбинацию содержащихся в них заместителей, поскольку эти вещества могут вести себя по-разному при смешивании вместе в одной и той же рецептуре. Действительно, другие также выдвинули идею изучения комбинаций компонентов энергетических напитков на человеческих моделях [9, 18, 25, 61], но, учитывая сложности контроля пищевых привычек человека, особенно когда речь идет о кофеине, мы предполагаем, что планарий system предлагает простой первый подход к изучению этих сложных взаимодействий.Также следует отметить, что наши наблюдения, сделанные при комбинировании экстракта семян гуараны, кофеина и глюкозы, показали краткосрочную пользу в низких концентрациях, противоречащую общему мнению, что «чем больше, тем лучше» в рецептурах энергетических напитков. Требуются дальнейшие исследования, но наши предварительные результаты с использованием модели планарии показывают, что более низкие дозы стимуляторов могут работать вместе, чтобы обеспечить краткосрочный стимулирующий эффект, и что сочетание большего количества этих ингредиентов может не дать долгосрочной пользы.

Гуарана обеспечивает дополнительную стимуляцию по сравнению с одним только кофеином в модели Planaria

Abstract

Стимулирующий эффект энергетических напитков в первую очередь объясняется содержащимся в них кофеином. Многие энергетические напитки также содержат другие ингредиенты, которые могут усилить тонизирующий эффект этих напитков с кофеином. Одной из таких добавок является гуарана. Гуарана — это вьющееся растение, произрастающее в бассейне Амазонки, в семенах которого содержится примерно в четыре раза больше кофеина, чем в кофейных зернах.Считается, что смесь других природных химических веществ, содержащихся в семенах гуараны, усиливает стимулирующее действие гуараны по сравнению с одним лишь кофеином. Тем не менее, несмотря на растущее использование гуараны в качестве добавки к энергетическим напиткам и растущий рынок ее в качестве пищевой добавки, наука, изучающая гуарану и то, как она влияет на другие пищевые ингредиенты, отсутствует. Чтобы оценить стимулирующие эффекты гуараны и других натуральных продуктов, необходима простая модель для исследования их физиологических свойств.Планария обеспечивает такую ​​систему. Было показано, что локомоторная активность и судорожная реакция планарий на воздействие вещества представляют собой превосходную систему для измерения эффектов стимуляции лекарствами, зависимости и отмены. Чтобы оценить стимулирующее действие гуараны, мы изучили, как она влияет на двигательную активность планарий вида Dugesia tigrina . Мы сообщаем о доказательствах того, что семена гуараны обеспечивают дополнительную стимуляцию по сравнению с одним только кофеином, и документируем изменения этой стимуляции в контексте как кофеина, так и глюкозы.

Введение

Кофеин считается основным стимулирующим компонентом энергетических напитков, в то время как сахара и другие вещества, такие как гуарана, таурин и женьшень, добавляются, часто в сочетании с витаминами, для приготовления различных смесей [1, 2]. Энергетические напитки стали признанным средством для повышения когнитивных способностей, памяти, бдительности, физической работоспособности и сердечно-сосудистой деятельности [3–10]. Но хотя потребление энергетических напитков продолжает расти, высказываются опасения по поводу высокого содержания в них кофеина, а вместе с этим и рисков, связанных с их потреблением, особенно молодыми людьми [1, 8, 11–15].Использование гуараны и других материалов на растительной основе может еще больше увеличить содержание кофеина и общие стимулирующие свойства этих напитков, но, поскольку они считаются растительными добавками, на эти добавки на растительной основе не распространяются те же требования к отчетности, что и на сахар и кофеин. Следовательно, концентрация этих добавок, не говоря уже о том, что они могут содержать, обычно не указывается в рецептурах энергетических напитков. Это непонимание ставит под вопрос, как комбинация полученных ингредиентов может работать вместе, чтобы повлиять на здоровье тех, кто потребляет содержащие их продукты [2, 12–14, 16–18].

Гуарана ( Paullinia cupana ) — вид вьющегося растения, произрастающего в Амазонии, который известен как антиоксидант, традиционное лекарственное средство и эффективный стимулятор [19–25]. В недавней работе также изучалось использование гуараны для борьбы с усталостью и депрессией, связанными с лечением рака [26–28]. Основным компонентом гуараны, которому приписывают эти полезные свойства, является кофеин, который, в зависимости от способа приготовления экстракта, может более чем в четыре раза превышать количество, содержащееся в кофейных зернах [19, 29].Кроме того, считается, что другие компоненты семян гуараны обладают дополнительным стимулирующим эффектом по сравнению с одним только кофеином [19–23, 30]. Таким образом, растительные продукты, такие как гуарана, являются привлекательной добавкой для производителей многих популярных составов энергетических напитков, несмотря на отсутствие исследований, посвященных ассоциативным свойствам растительных экстрактов с другими пищевыми добавками, лекарствами и стимуляторами [29].

Чтобы оценить роль гуараны как стимулятора по сравнению с одним только кофеином, мы разработали простую, легко управляемую систему, используя планарию Dugesia tigrina , свободноживущего водного плоского червя, в качестве модельного организма.Планарий чаще всего используют в исследованиях, направленных на регенерацию и восстановление тканей, благодаря их исключительной регенеративной способности [31]. Планарии также хорошо подходят для изучения стимуляторов, потому что они обладают базовой билатеральной симметрией и соответствующей центральной нервной системой, которая использует системы нейротрансмиттеров, сравнимые с обнаруженными у млекопитающих [32-39]. Планарии предпочитают темноту и используют фоторецепторы, чтобы обнаруживать свет и реагировать на него. Таким образом, планарии способны обучаться в лабиринтах и ​​могут вырабатывать условный ответ на свет, который может быть реализован в поведенческих исследованиях, в том числе при модификации лекарств [40, 41].Анализы подвижности планарии также были разработаны для исследований зависимости от психоактивных веществ и отмены [42–53]. Поскольку анализ подвижности планарии предлагает простую, легко контролируемую систему для мониторинга воздействия раздражителей, мы приняли этот анализ для использования в нашем исследовании гуараны. Предыдущие исследования также показали, что кофеин не вызывает значительного увеличения активности планарии [47, 50]. Это наблюдение послужило дополнительным стимулом для использования планарии в нашей работе, поскольку оно дает благоприятный фон для изучения тонизирующих эффектов гуараны отдельно от эффектов кофеина.

Наблюдая за изменениями в подвижности планарии при воздействии гуараны, кофеина и глюкозы, мы определили, что семена гуараны содержат дополнительный стимулятор по сравнению с одним только кофеином, и что глюкоза может поддерживать эти тонизирующие эффекты. Мы также предоставляем доказательства того, что гуарана дает краткосрочную дополнительную пользу в сочетании с кофеином. Наши данные также свидетельствуют о том, что комбинация гуараны, кофеина и глюкозы обеспечивает кратковременный стимул при низких концентрациях.

Материалы и методы

Разведение планарий

Планарий ( Dugesia tigrina ) были приобретены у компании Carolina Biological Supply Company (132954; Берлингтон, Северная Каролина).Этот вид также упоминается как Girardia tigrina [54]. Запасы содержали в темноте с использованием родниковой воды (Poland Spring), в которую часто добавляли 0,5 мМ NaHCO 3 . Для хранения образцов использовались пластиковые контейнеры для хранения пищевых продуктов с приоткрытыми крышками. Планариям давали возможность акклиматизироваться за одну неделю до кормления или экспериментов. В качестве пищи использовались органические яйца, сваренные вкрутую. Дважды в неделю небольшое количество яичного белка и желтка измельчали ​​и помещали в контейнеры.Планарии кормили ad libidum в течение одного-двух часов. Затем планарий переносили в свежие контейнеры и родниковую воду (Poland Spring). Культуральную воду меняли на следующий день, чтобы удалить мусор и сохранить воду свежей.

Тест скорости движения планарии (pLmV)

Тест скорости движения планарии (pLmV), установленный R.B. Raffa и S.M. Rawls был адаптирован для этого исследования [42, 43]. Вкратце, планарий приучали к соответствующему тестируемому веществу или комбинации в соответствующей концентрации либо в течение двух минут, либо в течение одного часа.Затем червей переносили в центр чашки Петри диаметром 10 см, помещенной на бумагу с сеткой, с линиями на расстоянии 0,5 см друг от друга, содержащей 20 мл того же испытуемого раствора. Подвижность планарии контролировали в течение 3 минут, оценивая количество пересеченных линий сетки. Испытываемые концентрации считались слишком высокими, если черви демонстрировали скручивание или судорожное поведение в течение периода привыкания. Каждое экспериментальное состояние тестировали не менее трех раз, и каждое испытание обычно проводили трижды, если не больше, так что окончательные данные pLmV оценивали с использованием по меньшей мере девяти червей для каждого условия.Для каждого теста исходные растворы экстракта гуараны, кофеина или глюкозы разводили в родниковой воде. Были предприняты меры для проведения тестов в разное время дня, чтобы учесть различные уровни зарождающейся или циркадной активности. Каждый набор тестов проводили два или три разных опытных экспериментатора. Не обнаружено заметного изменения качества воды, такого как pH, в результате применения исследуемых веществ в исследованных концентрациях. Каждый червь, включая контрольные экземпляры, использовался только один раз.

Стандартные растворы

Все растворы были приготовлены с использованием дистиллированной воды.Кофеин был приобретен у Sigma Aldrich (C7731; Сент-Луис, Миссури) и был приготовлен в виде исходного раствора с концентрацией 10 мМ или 1 мМ. D-глюкозу или декстрозу также получали от Sigma Aldrich (D9434; Сент-Луис, Миссури) в виде исходного раствора с концентрацией 561 мМ. Гуарана, использованная для этого исследования, была приобретена в Интернете в магазине Grass Hut Treasures (порошок цельных семян гуараны; www.grasshuttreasures.com/guarana/guaranapowder.html). Запасы гуараны были приготовлены на основе заявленного пятипроцентного содержания кофеина [19, 30]. Для приготовления 10 мМ и 1 мМ экстракта гуараны соответствующую массу порошка семян гуараны помещали в раствор, перемешивали в течение нескольких часов, а затем дважды фильтровали для удаления нерастворимого материала.Полученные экстракты гуараны охлаждали и хранили в бутылках, обернутых фольгой, чтобы защитить их от света.

Статистика

Все данные были нормализованы к соответствующим контролям и выражены как среднее +/- стандартное отклонение. Каждая точка данных была проанализирована с использованием двустороннего парного Т-критерия Стьюдента и считалась значимой, если соответствующее значение р было меньше 0,05.

Результаты

Гуарана обеспечивает дополнительную кратковременную стимуляцию по сравнению с одним только кофеином

Фактическая концентрация гуараны, присутствующей в энергетических напитках, обычно не сообщается, но кофеин считается основным стимулятором, присутствующим в семенах [19].Поэтому для приготовления растворов гуараны мы руководствовались опубликованными анализами содержания кофеина в семенах гуараны. Оцененное содержание кофеина в бобах гуараны варьировалось в зависимости от приготовления и метода анализа — от одного до двенадцати процентов — но обычно сообщалось, что оно составляет около пяти процентов [19, 24, 30]. Затем мы исследовали содержание кофеина в энергетических напитках, просматривая информацию, представленную на упаковках, и используя фиг. доступны на интернет-ресурсах. Эта информация использовалась для установления границ концентрации для наших тестов со стимуляторами [55, 56].Эти источники указывают на типичные концентрации кофеина в диапазоне от примерно 0,4 мМ до чуть более 2 мМ, поэтому мы выбрали диапазон концентраций, который соответствовал бы им и позволял нам свободно изучать комбинации как очищенного кофеина, так и гуараны, сохраняя при этом реалистичные концентрации кофеина. Выбранный диапазон охватывал от 0,001 до 10 мМ.

Тест скорости передвижения планарии (pLmV) был адаптирован для оценки стимулирующих свойств гуараны [42, 43]. Мы начали с тестирования набора концентраций, включая 0.001, 0,003, 0,01, 0,03, 0,1, 0,3, 1,0, 3,0 и 10 мМ и наблюдение за подвижностью планарии после двухминутного периода инкубации в экстракте семян гуараны (). Из протестированных концентраций наиболее эффективная стимуляция происходила выше 0,003 мМ, при этом значительная стимуляция происходила при 0,01 мМ (р = 0,02), 0,1 мМ (р = 0,008) и 1,0 мМ (р = 0,006). Экстракт семян гуараны в концентрации 10 мМ подавлял подвижность планарии (10) и вызывал многократное скручивание червей во время теста. Чтобы определить, обеспечит ли более длительное воздействие гуараны дополнительную стимуляцию или позволит более низким концентрациям воздействовать, мы наблюдали подвижность планарии через один час в 0.001, 0,003, 0,01, 0,03 и 0,1 мМ экстракта семян гуараны (). Как и при двухминутном воздействии, через час не наблюдалось значительной стимуляции подвижности планарий при 0,001 и 0,003 мМ. Мы по-прежнему наблюдали значительное увеличение активности при 0,01 мМ (p = 0,009), но эффект был потерян при 0,1 мМ.

Скорость движения планарии (pLmV) увеличивается в ответ на прием только гуараны.

Показаны выбранные данные pLmV относительно контролей, получавших только воду, для Dugesia tigrina , подвергшихся воздействию различных концентраций экстракта гуараны.Планарий приучали к соответствующим условиям либо в течение 2 минут (а), либо в течение 1 часа (б) до того, как отслеживали их активность pLmV. Подвижность планарии контролировали после того, как червей помещали в чашку Петри, содержащую соответствующую концентрацию экстракта семян гуараны, после тестируемого периода привыкания. Чашки Петри помещали на миллиметровую бумагу и в течение трех минут следили за количеством пересеченных линий сетки. Белая полоса представляет собой нормализованное контрольное значение pLmV, а черные столбцы указывают относительные значения pLmV для контрольного теста.Столбики погрешностей указывают на стандартное отклонение, а * указывает на p-значение менее 0,05 по сравнению с контролем только с водой.

В связи с тем, что наши результаты показали, что гуарана обеспечивает значительно большую стимуляцию подвижности планарий, мы продолжили тестировать влияние очищенного кофеина на pLmV. Поскольку другие исследователи определили, что кофеин не обеспечивает значительной стимуляции подвижности планарии, мы стремились использовать систему, чтобы оценить, обеспечивает ли гуарана дополнительный стимул по сравнению с одним кофеином [47, 50].Однако было необходимо определить, обеспечивают ли наша система и выбор видов планарий сопоставимый фон с этими опубликованными отчетами. Опять же, мы начали с тестирования подвижности планарии, используя диапазон концентраций кофеина (0,001, 0,003, 0,01, 0,03, 0,1, 0,3, 1,0, 3,0 и 10 мМ) после двухминутного периода воздействия (). Хотя подвижность планарии была немного повышена при концентрациях от 0,003 мМ до 3,0 мМ, мы не наблюдали какого-либо значительного увеличения общей активности планарии по сравнению с контрольной группой, получавшей только воду.Однако, поскольку рассчитанное p-значение для pLmV с использованием 0,001 мМ кофеина составило 0,05, что предполагает пограничную значимость, мы проверили, будут ли даже более низкие концентрации кофеина вызывать значительный пик активности. С этой целью мы исследовали эффект как 0,0001, так и 0,0003 мМ кофеина, но по-прежнему не наблюдали какого-либо значительного увеличения стимуляции по сравнению с контролем без кофеина (не показано). Как и в случае с экстрактом гуараны, 10 мМ кофеина подавляли подвижность планарии (1) и приводили к устойчивым сокращениям в течение периода анализа.Эти результаты сравнивали с временем инкубации в один час (1). Как и в случае с экстрактом гуараны, мы исследовали 0,001, 0,003, 0,01, 0,03 и 0,1 мМ, но опять же, кофеин сам по себе не вызывал существенного повышения pLmV. Эти результаты подтвердили, что очищенный кофеин обеспечивает заметную, хотя и незначительную стимуляцию движения планарии в испытанных концентрациях.

Кофеин сам по себе не способствует значительному увеличению скорости движения планарии (pLmV).

Показаны выбранные данные pLmV относительно контролей, получавших только воду, для Dugesia tigrina , подвергшихся воздействию различных концентраций кофеина.Планарий приучали к соответствующим условиям либо в течение 2 минут (а), либо в течение 1 часа (б) до того, как отслеживали их активность pLmV. Подвижность планарии контролировали после того, как червей помещали в чашку Петри, содержащую соответствующую концентрацию кофеина, после тестируемого периода привыкания. Чашки Петри помещали на миллиметровую бумагу и в течение трех минут следили за количеством пересеченных линий сетки. Белая полоса представляет собой нормализованное контрольное значение pLmV, а черные столбцы указывают относительные значения pLmV для контрольного теста.Столбики погрешностей указывают на стандартное отклонение, а * указывает на p-значение менее 0,05 по сравнению с контролем только с водой.

Чтобы определить, можно ли добиться дополнительного стимулирующего эффекта за счет сочетания кофеина и гуараны, мы использовали растворы, содержащие как низкие, так и высокие концентрации кофеина и экстракта семян гуараны, и оценивали активность планарии после экспозиции в течение двух минут или одного часа ( ). Поскольку экстракт семян гуараны в концентрации 0,1 мМ обеспечивает самый высокий средний относительный pLmV в тестируемом диапазоне концентраций, мы выбрали эту концентрацию для нашей высококачественной комбинации с кофеином.Концентрация кофеина 0,1 мМ также обеспечивала наибольшую среднюю относительную стимуляцию (рассчитанную как 1,21) на верхнем пределе по сравнению с контролем только с водой, несмотря на то, что она была меньше, чем пиковая концентрация 0,001 мМ, выбранная для комбинаций нижнего предела, которая имела средний относительный pLmV 1,26 (+). Комбинация 0,001 мМ кофеина и экстракта семян гуараны не привела к значительному повышению показателей pLmV ни через две минуты, ни через час. Однако, используя более высокую концентрацию 0,1 мМ для обоих растворов, мы наблюдали увеличение скорости движения через две минуты, но не через один час ().Среднее относительное значение pLmV при использовании комбинированного раствора после двухминутного воздействия было несколько выше, чем при использовании только экстракта гуараны, 1,55 () против 1,44 () соответственно. Эти два набора данных значительно отличались друг от друга с p-значением 0,006. Наши результаты показали, что гуарана обеспечивает дополнительный уровень стимуляции по сравнению с кофеином.

Гуарана поддерживает дополнительную кратковременную стимуляцию скорости движения планарии (pLmV) по сравнению с одним только кофеином.

Показаны данные pLmV относительно контролей, получавших только воду, для Dugesia tigrina , подвергшихся воздействию комбинации 0,001 мМ экстракта семян гуараны и 0,001 мМ кофеина (серые столбцы) или 0,1 мМ экстракта гуараны и 0,001 мМ кофеина (черные столбцы). Планарий приучали к соответствующим условиям либо в течение 2 минут, либо в течение 1 часа, как указано, до того, как отслеживали их активность pLmV. Подвижность планарии контролировали после того, как червей помещали в чашку Петри, содержащую соответствующие концентрации экстракта семян гуараны и кофеина, после тестируемого периода привыкания.Чашки Петри помещали на миллиметровую бумагу и в течение трех минут следили за количеством пересеченных линий сетки. Белая полоса представляет собой нормализованное контрольное значение pLmV, а черные столбцы указывают относительные значения pLmV для контрольного теста. Столбики погрешностей указывают на стандартное отклонение, а * указывает на p-значение менее 0,05 по сравнению с контролем только с водой.

Низкие концентрации глюкозы поддерживают долгосрочную стимуляцию гуараной

Поскольку сахар также является основным ингредиентом большинства энергетических напитков, мы далее оценили, как глюкоза влияет на стимуляцию гуараной и кофеином.Для начала мы определили, сколько сахара содержится в этих напитках, изучив список ингредиентов на упаковках. Часто содержание сахара не сообщалось полностью или просто указывалось как «сахар», без предоставления подробной информации о том, какой именно сахар учитывался. Кроме того, если был указан тип сахара, часто сообщалось о разных количествах для каждого из них — сахарозы, фруктозы и глюкозы. Также было обнаружено, что «специальные смеси» содержат дополнительный сахар без раскрытия концентрации. Мы также оценивали диапазоны концентраций с помощью онлайн-ресурсов [55, 57].Мы решили использовать глюкозу в качестве стандарта сахара, потому что это наиболее легко метаболизируемый сахар, и определили, что концентрация сахара колеблется от 290 до 730 мМ. Затем мы рассчитали среднюю концентрацию сахара, указанную на упаковках с напитками, как 561 мМ, которую мы приняли за глюкозу. Мы использовали этот рисунок для приготовления нашего стандартного маточного раствора. Как и в случае с гуараной и кофеином, мы провели исследование pLmV, используя только глюкозу после экспозиции в течение двух минут и одного часа (2). Концентрация 561 мМ оказалась ингибирующей передвижение планарии, что определялось повторяющимся поведением скручивания, и поэтому мы провели наши эксперименты с серией концентраций глюкозы ниже этого значения (0.561, 1,683, 5,61, 16,83, 56,1, 168,3 и 561 мМ). Мы не обнаружили какого-либо значительного увеличения pLmV при использовании любой из этих концентраций после двухминутного или одночасового периода воздействия. Однако мы обнаружили пик средней относительной стимуляции 1,22 при 5,61 мМ после двухминутного привыкания. Это значительно отличалось от среднего относительного pLmV 0,92 при 0,561 мМ с p-значением p = 6,0×10 -6 (). Напротив, средние относительные двигательные скорости для концентраций глюкозы, протестированные после одночасового воздействия глюкозы (), не привели к каким-либо заметным пикам стимуляции выше контроля с водой, несмотря на значительную разницу между 0.561 и 5,61 мМ (средний относительный pLmV 1,15 и 1,17 соответственно; p = 0,011).

Глюкоза сама по себе не способствует значительному увеличению двигательной скорости планарии (pLmV).

Показаны выбранные данные pLmV относительно контролей, получавших только воду, для Dugesia tigrina , подвергшихся воздействию различных концентраций глюкозы. Планарий приучали к соответствующим условиям либо в течение 2 минут (а), либо в течение 1 часа (б) до того, как отслеживали их активность pLmV. Подвижность планарии контролировали после помещения червей в чашку Петри, содержащую соответствующую концентрацию глюкозы, после тестируемого периода привыкания.Чашки Петри помещали на миллиметровую бумагу и в течение трех минут следили за количеством пересеченных линий сетки. Белая полоса представляет собой нормализованное контрольное значение pLmV, а черные столбцы указывают относительные значения pLmV для контрольного теста. Столбики погрешностей указывают на стандартное отклонение, а * указывает на p-значение менее 0,05 по сравнению с контролем только с водой.

Затем мы оценили, как комбинация гуараны с глюкозой влияет на pLmV, используя низкие и высокие концентрации после двухминутного и одночасового воздействия ().На нижнем уровне, при концентрации 0,001 мМ экстракта гуараны, дополненного 0,561 мМ глюкозы, мы наблюдали значительное увеличение подвижности через один час (p = 1,5×10 -4 ). Важно отметить, что ни экстракт гуараны, ни глюкоза сами по себе не оказывали значительной стимуляции в этот момент времени при 0,001 мМ или 0,561 мМ соответственно. Это говорит о том, что при низких концентрациях глюкоза оказывает поддерживающее действие на стимуляцию гуараной в течение более длительного периода времени. Напротив, этот эффект не был очевиден при использовании комбинированной высококонцентрированной концентрации, состоящей из 0.1 мМ гуараны и 5,61 мМ глюкозы, что на самом деле слегка подавляло подвижность планарии в среднем после одночасового периода воздействия. Вместо этого высокие данные о концентрации привели к значительной стимуляции через две минуты (p = 0,032). Примечательно, что гуарана действительно обеспечивала стимуляцию в качестве отдельного реагента через две минуты при концентрации 0,1 мМ со средним относительным pLmV 1,44 по сравнению с контролем с водой (), а с глюкозой это значение фактически снизилось до pLmV 1,24 по сравнению с контролем ( ).Статистический анализ показал, что двухминутные однократные данные гуараны при 0,1 мМ и комбинированные данные высокой концентрации с использованием экстракта гуараны и глюкозы значительно отличались друг от друга (p = 1,0×10 -7 ).

Глюкоза поддерживает стимуляцию гуараной двигательной скорости планарии (pLmV).

Показаны данные pLmV относительно контролей, получавших только воду, для Dugesia tigrina , подвергшихся воздействию комбинации 0,001 мМ экстракта семян гуараны и 0,561 мМ глюкозы (серые столбцы), или 0.Экстракт семян гуараны 1 мМ и глюкоза 5,61 мМ (черные столбцы). Планарий приучали к соответствующим условиям либо в течение 2 минут, либо в течение 1 часа, как указано, до того, как отслеживали их активность pLmV. Подвижность планарии контролировали после того, как червей помещали в чашку Петри, содержащую соответствующие концентрации экстракта гуараны и глюкозы, после тестируемого периода привыкания. Чашки Петри помещали на миллиметровую бумагу и в течение трех минут следили за количеством пересеченных линий сетки.Белая полоса представляет собой нормализованное контрольное значение pLmV, а черные столбцы указывают относительные значения pLmV для контрольного теста. Столбики погрешностей указывают на стандартное отклонение, а * указывает на p-значение менее 0,05 по сравнению с контролем только с водой.

Напротив, после дополнительной оценки кофеина и глюкозы () мы не наблюдали увеличения скорости движения планарии ни при низких, ни при высоких концентрациях в течение инкубационного периода продолжительностью две минуты и один час.Эти результаты еще раз подчеркнули потенциальную разницу между гуараной и кофеином в том, что реакция на глюкозу была разной между двумя стимуляторами.

Глюкоза не усиливает действие кофеина на скорость движения планарии (pLmV).

Показаны данные pLmV относительно контролей, получавших только воду, для Dugesia tigrina , подвергшихся воздействию комбинации 0,001 мМ кофеина и 0,561 мМ глюкозы (серые столбцы) или 0,1 мМ кофеина и 5,61 мМ глюкозы (черные столбцы). Планарий приучали к соответствующим условиям либо в течение 2 минут, либо в течение 1 часа, как указано, до того, как отслеживали их активность pLmV.Подвижность планарии контролировали после того, как червей помещали в чашку Петри, содержащую соответствующие концентрации кофеина и глюкозы, после тестируемого периода привыкания. Чашки Петри помещали на миллиметровую бумагу и в течение трех минут следили за количеством пересеченных линий сетки. Белая полоса представляет собой нормализованное контрольное значение pLmV, а черные столбцы указывают относительные значения pLmV для контрольного теста. Столбики погрешностей указывают на стандартное отклонение, а * указывает на p-значение меньше 0.05 по сравнению с контролем только на воде.

Гуарана в сочетании с глюкозой и кофеином обеспечивает краткосрочный стимул при низких концентрациях

При оценке скорости движения с использованием экстракта семян гуараны вместе с кофеином и глюкозой () каждая гуарана и кофеин с 0,561 мМ глюкозы) всего через две минуты привыкания (p = 0,041). Важно отметить, что мы не обнаружили стимуляции низкой концентрации через две минуты с двойными комбинациями экстракта семян гуараны и кофеина, экстракта семян гуараны и глюкозы или кофеина и глюкозы (рис. 1 и 2 соответственно).Это говорит о том, что некоторое стимулирующее действие может быть достигнуто за счет комбинации всех трех веществ, которое могло бы не проявляться иначе при более низких концентрациях любого из трех веществ по отдельности или в паре в течение короткого времени. Значимый стимул низкой концентрации сохранялся в течение одного часа, хотя и на более низком уровне, со средним относительным значением стимуляции 1,21 по сравнению с 1,36, которое наблюдалось через две минуты (p = 0,016). Но мы также наблюдали средний относительный стимул низкой концентрации с экстрактом гуараны при 0.0,001 мМ в сочетании с 0,561 мМ глюкозы при 1,31 (1,31) в час, что было больше, чем при добавлении кофеина в тройную комбинацию, что свидетельствует о том, что кофеин может не способствовать одночасовой тройной комбинированной стимуляции pLmV при низкие концентрации.

Гуарана с глюкозой и кофеином поддерживает двигательную скорость планарии (pLmV) при низких концентрациях.

Показаны данные pLmV относительно контролей, получавших только воду, для Dugesia tigrina , подвергшихся воздействию комбинации 0.0,001 мМ экстракта семян гуараны, 0,001 мМ кофеина и 0,561 мМ глюкозы (серые столбцы) или 0,1 мМ экстракта семян гуараны, 0,1 мМ кофеина и 5,61 мМ глюкозы (черные столбцы). Планарий приучали к соответствующим условиям либо в течение 2 минут, либо в течение 1 часа, как указано, до того, как отслеживали их активность pLmV. Подвижность планарии контролировали после того, как червей помещали в чашку Петри, содержащую соответствующие концентрации экстракта гуараны, кофеина и глюкозы, после тестируемого периода привыкания.Чашки Петри помещали на миллиметровую бумагу и в течение трех минут следили за количеством пересеченных линий сетки. Белая полоса представляет собой нормализованное контрольное значение pLmV, а черные столбцы указывают относительные значения pLmV для контрольного теста. Столбики погрешностей указывают на стандартное отклонение, а * указывает на p-значение менее 0,05 по сравнению с контролем только с водой.

Напротив, несмотря на наблюдаемое улучшение pLmV по сравнению с контролем, когда планарии подвергались воздействию комбинации экстракта семян гуараны и кофеина в более высоких концентрациях (0.1 мМ каждого; ) и комбинации экстракта гуараны и глюкозы (0,1 мМ экстракта семян гуараны и 5,61 мМ глюкозы; ) уже через две минуты мы не наблюдали значительной дополнительной стимуляции при использовании более высоких концентраций всех трех веществ (0,1 мМ для обоих семян гуараны). экстракт и кофеин, с 5,61 мМ глюкозы) после кратковременного двухминутного воздействия. Эти данные свидетельствуют о том, что краткосрочная польза достигается с гуараной, кофеином и глюкозой, но при комбинировании в более низких концентрациях.

Обсуждение

Энергетические напитки обычно содержат кофеин и сахар в качестве основных активных ингредиентов. Но многие популярные бренды также содержат смеси других веществ, которые якобы обеспечивают дополнительный стимул. Одной из таких все более распространенных добавок является гуарана. В этом исследовании мы задались вопросом, может ли гуарана оказывать дополнительный стимулирующий эффект по сравнению с одним только кофеином, используя анализ двигательной активности планарии (pLmV) [42, 43]. Сообщения, предполагающие, что кофеин не оказывает существенного влияния на активность планарии, поддержали наш выбор модельной системы, поскольку она позволила нам обнаружить тонизирующие эффекты компонентов семян гуараны отдельно от эффектов, обеспечиваемых кофеином [47, 50].В связи с тем, что кофеин обычно считается ответственным за стимулирующие свойства гуараны, мы использовали заявленное пятипроцентное содержание кофеина в семенах гуараны и типичный диапазон концентраций кофеина, указанный для большинства составов энергетических напитков, в качестве отправной точки для нашей работы. концентрации гуараны [19, 30, 55, 56].

При сравнении концентраций кофеина и гуараны на подвижность планарии действительно было очевидно, что кофеин не вызывал значительного увеличения pLmV ни при каких протестированных концентрациях, в то время как гуарана оказывала положительный эффект в диапазоне концентраций от 0.01 до 1,0 мМ (рис. и ). Примечательно, что средний относительный pLmV для каждой из концентраций кофеина выше 0,1 мМ после двухминутного привыкания, хотя и незначительно отличается от контроля с водой, имеет тенденцию к снижению и значительно выше 1,0 мМ, в том смысле, что p-значения между эти различные концентрации кофеина были менее 0,05 (+). Это контрастировало с результатами для одного только экстракта гуараны через две минуты, когда мы наблюдали пик стимуляции при использовании концентрации 0.1 мМ, но с сохранением значительного стимулирующего воздействия по сравнению с водными контролями даже при десятикратно более высокой концентрации (). Если бы мы выбрали менее консервативное содержание кофеина для нашего порошка семян гуараны, например, верхнюю оценку содержания кофеина в 10 процентов (удвоив нашу оценку), наша верхняя предельная концентрация 1,0 мМ была бы порядка 2,0 мМ кофеина и имела бы гораздо более высокий средний относительный pLmV по сравнению с одним кофеином. Таким образом, поскольку данные для кофеина и экстракта гуараны не соответствуют одному и тому же общему образцу активности, это также предполагает, что гуарана обеспечивает другое стимулирующее значение, отличное от кофеина.

Анализ данных pLmV, собранных после одночасового привыкания к одному кофеину, не выявил признаков стимуляции при любой тестируемой концентрации, что указывает на то, что даже тенденция к низкому уровню стимуляции, хотя и не значительно больше, чем контрольная вода, была короткой. -термин эффект (). В противоположность этому, данные, полученные через час после воздействия pLmV, подвергнутого воздействию экстракта семян гуараны, показали значительный стимул при 0,01 мМ, но не при 0,1 мМ (10). Эти результаты, полученные с помощью гуараны, показали, что более долгосрочный стимул может поддерживаться при более низких концентрациях, что является дополнительным доказательством в поддержку разницы между стимуляцией гуараной и кофеином.В целом, однако, мы предполагаем, что одночасовые данные как для кофеина, так и для гуараны указывают на то, что реакция типа толерантности возникает при длительном воздействии более высоких концентраций этих стимуляторов. Важно отметить, что другие исследователи заметили, что планарии лучше всего реагируют на стимуляторы в течение первых пяти минут воздействия, что также отражено в наших выводах [50].

Наши данные о двигательной активности, сочетающие выбранные низкие и высокие концентрации экстракта семян гуараны и кофеина (), показали, что гуарана обеспечивает дополнительную стимуляцию по сравнению с тем, что обеспечивается одним кофеином.Ни экстракт семян гуараны, ни кофеин сами по себе не обеспечивали заметного увеличения pLmV в качестве отдельного стимулятора при низкой исследованной концентрации (0,001 мМ, рис. и , соответственно), и это не изменилось при комбинировании веществ (). Но при комбинировании более высоких концентраций 0,1 мМ наблюдалось увеличение относительной средней подвижности после кратковременного двухминутного воздействия (2). Этот средний относительный pLmV был выше, чем тот, который наблюдался только для экстракта гуараны, что указывает на дополнительную кратковременную стимуляцию за счет комбинации более высоких концентраций гуараны и кофеина.Кроме того, поскольку такой аддитивный эффект не наблюдался при простом увеличении концентрации кофеина (), дополнительная стимуляция, обеспечиваемая экстрактом семян гуараны, может быть обеспечена каким-либо другим водорастворимым ингредиентом в семенах, который функционирует с использованием метаболического пути, отличного от используемого. кофеином. Примечательно, что другая группа, изучавшая влияние гуараны на мышей, также наблюдала увеличение активности, которое, вероятно, действовало с использованием механизма, отличного от механизма, используемого кофеином [20].Подтверждая нашу гипотезу о том, что гуарана обладает стимулирующими свойствами независимо от кофеина, этот подтверждающий результат также поддерживает использование планарии для исследований, связанных со стимулирующими эффектами в системах млекопитающих.

Предполагается, что стимулирующий эффект кофеина опосредуется рядом механизмов, включая внутриклеточную мобилизацию кальция, ингибирование фосфодиэстераз, связывание кофеина с бензодиазепиновыми рецепторами и антагонизм на уровне аденозиновых рецепторов [58, 59] .В то время как кофеин в гуаране, вероятно, работает по этим механизмам, другие компоненты, возможно, действуют по другим путям. Известно, что в дополнение к кофеину семена гуараны содержат ряд других возможных стимуляторов, таких как катахины, дубильные вещества и другие алкалоиды, такие как теофиллин и теобромин [19, 22, 30, 60]. В настоящее время имеется мало информации о преимуществах одного из этих ингредиентов перед другими.

Мы расширили нашу работу, чтобы рассмотреть влияние сахара на pLmV в сочетании с кофеином и нашим экстрактом семян гуараны.Конкретные сахара в разновидностях энергетических напитков различаются, поэтому в нашем исследовании мы решили работать с D-глюкозой или декстрозой. Не все производители энергетических напитков раскрывают полные концентрации сахаров в своих рецептурах, поэтому мы рассчитали среднюю концентрацию для использования в наших экспериментах. Мы получили это значение, усреднив количество сахара, указанное на нескольких контейнерах, которые давали некоторые сведения об общем количестве содержащихся в них сахаров. Мы сравнили это количество с оценками общего содержания сахара в энергетических напитках, обнаруженными в Интернете, которые были отражены в выбранной нами концентрации запасов [55, 57].Хотя мы наблюдали, что глюкоза сама по себе не вызывала очевидной стимуляции подвижности планарии (1), она действительно поддерживала стимуляцию гуараной при низких концентрациях в течение более длительного времени (12). Это особенно интересно тем, что ни одна глюкоза (1), ни экстракт семян гуараны (1) не приводили к увеличению pLmV после одночасового привыкания к этим концентрациям. Мы также наблюдали значительную кратковременную относительную среднюю стимуляцию при комбинировании высоких концентраций глюкозы и экстракта семян гуараны (), но поскольку только экстракт семян гуараны приводил к значительному увеличению pLmV () через тот же период времени, было невозможно определить, усилила ли глюкоза этот эффект, используя нашу систему.Но наши данные свидетельствуют о том, что при низких концентрациях глюкоза оказывает поддерживающее действие на стимуляцию гуараной в течение более длительных периодов времени. Эти данные согласуются с опубликованными сообщениями о том, что глюкоза может поддерживать эффект стимуляторов в модели планарии [48]. И наоборот, наши комбинации глюкозы и кофеина не приводили к увеличению подвижности планарии ни в один из исследованных моментов времени (2), что является дополнительным свидетельством стимулирующих свойств гуараны, которые действительно отличаются от свойств кофеина.

Совместное воздействие на планарий экстракта семян гуараны, кофеина и глюкозы привело к усилению подвижности планарий как после краткосрочной, так и при длительной стимуляции, но только при нашей комбинации с низкой концентрацией (). Однако, поскольку наша низкая концентрация экстракта семян гуараны в сочетании с низкой концентрацией глюкозы также обеспечивала устойчивую значительную стимуляцию после одночасовой инкубации, мы не можем сделать вывод, что кофеин оказывал дополнительный эффект в этой ситуации. С другой стороны, тройная комбинация была единственной протестированной, которая привела к увеличению pLmV уже после двух минут воздействия стимулятора.Примечательно, что эти данные свидетельствуют о том, что низкие концентрации гуараны, кофеина и глюкозы в сочетании достаточны для обеспечения краткосрочного стимула.

Мы повторяем, что, поскольку и кофеин, и глюкоза обеспечивают лишь низкий уровень стимуляции в модели планарии, мы смогли обнаружить возможность других стимулирующих веществ в экстракте семян гуараны и оценить, могут ли кофеин и глюкоза усиливать эти эффекты. Будущие исследования потребуются для определения фактического дополнительного стимулятора, содержащегося в гуаране [19].Но наше общее впечатление от этой работы состоит в том, что гуарана предлагает дополнительную стимуляцию по сравнению с кофеином, и что как кофеин, так и глюкоза могут изменить характер этой стимуляции. Очевидно, что для полной оценки того, как энергетические напитки влияют на физиологию, важно учитывать комбинацию содержащихся в них заместителей, поскольку эти вещества могут вести себя по-разному при смешивании вместе в одной и той же рецептуре. Действительно, другие также выдвинули идею изучения комбинаций компонентов энергетических напитков на человеческих моделях [9, 18, 25, 61], но, учитывая сложности контроля пищевых привычек человека, особенно когда речь идет о кофеине, мы предполагаем, что планарий system предлагает простой первый подход к изучению этих сложных взаимодействий.Также следует отметить, что наши наблюдения, сделанные при комбинировании экстракта семян гуараны, кофеина и глюкозы, показали краткосрочную пользу в низких концентрациях, противоречащую общему мнению, что «чем больше, тем лучше» в рецептурах энергетических напитков. Требуются дальнейшие исследования, но наши предварительные результаты с использованием модели планарии показывают, что более низкие дозы стимуляторов могут работать вместе, чтобы обеспечить краткосрочный стимулирующий эффект, и что сочетание большего количества этих ингредиентов может не дать долгосрочной пользы.

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.


Настройка браузера на прием файлов cookie

Существует множество причин, по которым файл cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее распространенные причины:

  • В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки браузера, чтобы принять файлы cookie, или спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
  • Ваш браузер спрашивает, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файл cookie.
  • Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Попробуйте другой браузер, если вы подозреваете это.
  • Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы это исправить, установите правильное время и дату на своем компьютере.
  • Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Предоставить доступ без файлов cookie потребует от сайта создания нового сеанса для каждой посещаемой вами страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.


Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в файле cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.